Could the ENPP1 p.D85H Mutation be Associated with Hypophosphatemic Rickets?

İlhan SATMAN, Ayşe KUBAT ÜZÜM, Kıvanç CEFLE, Sakin TEKİN, Şükrü PALANDUZ, Refik TANAKOL, Hakan AVCI, Ender COŞKUNPINAR, N. Ozan TİRYAKİOĞLU

Abstract

Objective: A 35-year-old Turkish male patient was referred tous with a year-long history of joint paint and congenital hearingloss. Family history revealed more family members with hearingloss without paraneoplastic syndrome. These findings led us toinvestigate the genetic alterations associated with familial hypo-phosphatemia, which revealed an ENPP1 mutation.Methods: Serum samples were obtained after 12-hour fasting.The mutation analysis was performed using previously describedprimers. Total RNA was isolated from blood samples using Qia-gen Total RNA extraction mini kit. cDNA samples were am-plified using polymerase chain reaction (PCR), and these PCRproducts were purified using commercial kits. Following amplifi-cation and purification, the PCR products were sequenced.Results: The patient was found to have hypophosphatemia, ahigh level of PTH, and elevated plasma alkaline phosphatase.Sequencing results revealed an ENPP1 p.D85H mutation.Conclusion: We present the identification of an inactivatingmutation in the ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodies-terase-1. The substituted amino acid residue is highly conservedin ENPP1. At present, we have no further explanation, but ourresults suggest that ENPP1 p.D85H mutation may be associatedwith hypophosphatemic rickets accompanied by hearing loss.

Özet

Amaç: Otuz beş yaşında erkek hasta eklem ağrısı ve doğuştan duyma kaybı şikayetleri ile başvurmuştur. Aile hikayesi parane- oplastik sendrom ile ilişkili olmayan duyma kaybına sahip diğer aile üyeleri olduğunu ortaya çıkarmıştır. Bu bulgular bizi ailesel hipofosfatemi ile ilişkili genetik değişiklikleri incelemeye yönlen- direrek bir ENPP1 mutasyonu tespitini sağlamıştır. Yöntemler: Serum örnekleri 12 saat açlık sonrası toplanmış- tır. Mutasyon analizi için daha önce tarif edilen primerler kul- lanılmıştır. RNA izolasyonu kit ile gerçekleştirilmiştir. cDNA örnekleri PCR ile çoğaltılmış ve PCR ürünleri ticari kitlerle saflaştırılmıştır. Amplifikasyon ve pürifikasyon sonrası ürünler dizilenmiştir. Bulgular: Hastada hipofosfatemi, yüksek PTH seviyeleri ve art- mış alkalin fosfataz seviyeleri belirlenmiştir. Dizileme sonuçları ENPP1 p.D85H mutasyonunu ortaya çıkarmıştır. Sonuç: Endonükleotid fosfodiesteraz 1 geninde inaktive edici bir mutasyon tanımladık. Değişen amino asit türler arası evrimsel korunum göstermektedir. Şu anda daha fazla açıklama sunama- sak da sonuçlarımız ENPP1 p.D85H mutasyonunun duyma kaybı tarafından eşlik edilen hipofosfatemik rikets ile ilişkili ola- bileceğini göstermektedir.