Studies on sexing of rabbit embryos by measuring of growth rate and X-linked enzyme activity.

Tavşan embriyolarının gelişme hızlarını ve x kromozomuna bağlı enzim aktivasyonlarını ölçerek cinsiyetlerini saptama üzerinde çalışmalar

Abstract

This study was performed with the purpose of determining of the relationship between sex and growth rate as well X-linked enzyme activity of rabbit embryos and to investigate to usefulness of these features for determining the embryonic sex in early periods. In the study, 40 female and 10 male New Zealand white rabbits were used as a material. Twenty out of 40 female rabbits have been operated at postcoital 96'1' hour and the other twenty at J20'1' hour. Embryos were collected by flushing oviduct and uterus. Then, embryos were examined microscopically and their stages were determined. Next, morphologically normal embryos have been put in petri dishes according to the stage of embryos and their enzyme activities were measured. In order for sex identification by determining X-linked enzyme activity. Brilliant Cresyl Blue (Sigma) and reaction mixture (PBS + 0.3% BSA + 0.05 mM fi-NADP + 0.5 mM Na-G6P; Sigma) was used. So as to specify which sex they possess the 'karyotype of embryos of which their stage and enzyme activities determined was prepared. In this study 113 female and 122 male embryos have been obtained variable in stage. According to G6PD (glucose-6-phosphate dehydrogenase) activity, 60.18% of female embryos and 58.2% of male embryos were correctly identified as to sex (p>0,05). As a result of chromosome analysis, in 53.7% of male embryos and 50% of female embryos sex identification was correct as to their stages. In the study, 119 embryos have been determined as female and 116 embryos have been determined as male according to enzyme activity. Finally, 55.32% of 119 female embryos and 60% of 116 male embryos were correctly determined. In 92 of 147 embryos (62.59%)) used for chromosome analysis embryonic sexing specified. Of these embryos, 48 (52.17%) and 44 (47.83%) were found to be mal e and fe nude respectively (p>0,05). As a consequence, as to embryo stage, correct embryo sexing rate was 53.7%; in males and 50% in females. As for G6PD activity this rate was 60% in males and 55.32% in females. In both techniques, male-female ratio was found to be similar (p>0,05).

Özet

Bu çalışma, tavşan embriyolarının gelişme hızları ve X kromoz.omuna bağlı enzim aktivasyonlan ile cinsiyetleri arasındaki ilişkiyi belirlemek ve bu özelliklerin erken dönemde embriyonik cinsiyet saptanmasında kullanılabilirliğini araştırmak amacıyla yapıldı. Çalışmanın hayvan materyalini 40 dişi ve 10 erkek Yeni Zelanda beyaz tavşanı oluşturdu. Dişilerden 20'si çiftleşmeden sonraki 96. ve diğer 20'si ise 120. saatte operasyona alındı. Oviduct ve uterus yıkanarak elde edilen embriyoların gelişme evreleri belirlendi ve düzgün morfolojik yapılı embriyolar gelişine aşamalarına göre ayrı ayrı petri kutularına konularak enzim aktivasyonlan ölçüldü. X kromoz.omuna bağlı enzim aktivasyonunu belirleyerek cinsiyeti saptamak için Brilliant Cresyl Blue ve Reaksiyon Karışımı kullanıldı. Gelişme aşamaları ve enzim aktivasyonlan belirlenen embriyoların gerçekte hangi cinsiyette olduklarını saptamak için karyotipleri hazırlandı. Çalışmada gelişme aşamalarına göre 113 dişi ve 122 erkek embriyo elde edildi. G6PD (glikoz.-6-fosfat dehidrojenaz.) aktivitesine göre dişi embriyolardan %60,18'inin, erkek embriyolardan ise %58,2'sinin tanısı doğru yapıldı (p>0,05). Kromozom analizi sonucunda, gelişme aşamasına göre erkek olarak ayrılan embriyolardan %53,7'sinde ve dişi olarak ayrılan embriyolardan %50'sinde cinsiyet tanısının doğruluğu belirlendi. Çalışma sırasında enzim aktivitesine göre dişi oldukları belirlenen 119 embriyodan %55,32'sinin dişi; erkek oldukları belirlenen 116 embriyodan ise %60'ının erkek olduğu doğrulandı. Kromozom analizi için kullanılan 147 embriyonun 92 'sinde (%62,59) embriyonik cinsiyet belirlendi. Bu embriyoların 48'inin erkek (%52,17) ve 44'ünün (%47,83) elişi olduğu saptandı (p>0,05). Çalışma sonucunda gelişme aşamasına göre cinsiyetin erkeklerde %53,7, dişilerde %50; G6PD aktivitesi sonuçlarına göre de erkeklerde %60, dişilerde %55,32 oranında doğruluğu belirlendi. Her iki yöntemde de erkek:dişi oranlan genelde birbirine yakın bulundu (p>0,05).