The determination of rats cyclic periods and pregnancy by means of vaginal smear method using two staining techniques

Gebelik ve siklus dönemlerinin belirlenmesi amacıyla ratlarda vaginal sitolojinin kullanılması

Abstract

In the present study, the purpose is to investigate whether sexual periods and pregnancy can be determined by means of vaginal smear in rats bred under laboratory conditions. This study was performed on 10 female Spraque-Dawley rats we-ighing between 220-250 g and at the age of 6-12 months. The welfare conditions of the rats were became the same. Total 180 vaginal smear samples taken from the all rats at an interval of 6-12 hours, were assessed according to staining procedure of Papanicolaou and toluidine blue. Each rat's cyclic phase was determined by microscopic examinations and a male was placed to the cage of the rats in eostrus period. The proportion of the vaginal smear with regard to cyclic phases was found as 13.4% pro-oestrus (n=12); 6.6% early oestrus (n=6), 13.4% mid-oestrus (n=12), 5.6% late oestrus-(n=5); 18.8% early metoestrus (n=3), 7.7% dioestrus (n=7) and 31.1% pregnancy (n=28). According to the assesment carried out depending on the observation of cell features such as cell's clearity, sta-ining quality of nucleus, cell membrane and cytoplasm, acidophily, basophily, keratinization, clearity of mucus and leukocytes and also the persistency of preparations, it has been found that toluidine blue method could be used, but Papanicolaou procedure gives more ideal results. In addition to the differences in determining the features mentioned above, it has been concluded that toluidine blue method does not give sufficient results for each sample in defining cyclic phases. As for smears stained with Papanicolaou pro-cedure, together with the differentiation of different cell types, proportional cell data and knowledge about transition period could be obtained. Besides, vaginal smear can give a strong idea on the presence of pregnancy depending on the observation of luteal phase cells and dark green mucous plaques.

Özet

Bu çalışmada laboratuvar koşullarında yetiştirilen ratlarda, vaginal smear yöntemiyle, seksüel siklus dönemlerinin ve gebeliğin saptanması, ayrıca farklı iki boyama yönteminin karşılaştırılması amaçlanmıştır. Çalışma, yaşlan 6-12 ay ve ağırlıkları 220-250 g arasında değişen Spraque-Dawley ırkı 10 adet dişi rat üzerinde yürütülmüştür. Bakım ve beslenme koşulları bir örnek hale ge-tirilmiştir. Altı-12 saatlik aralıklarla, tüm materyalden alınan toplam 180 adet örnek, Papanicolaou ve toulidine blue yöntemine göre boyanarak incelenmiştir. Yapılan mikroskobik muayene sonucu, her bir ratın bulunduğu siklik evre belirlenip, östrıısta olduğu sap-tanan dişilerin kafeslerine erkek bırakılmıştır. Elde edilen vaginal smear'lerın siklik evrelere göre dağılımı %13.4 proöstrus (n=12); %6.6 östrus başlangıcı (n= 6), %13.4 östrus ortası (n= 12), %5.6 östrus sonu (n=5); %18.8 metaöstrus başlangıcı (n=17), %3.4 me-taöstrus sonu (n=3); %7.7 diöstrus (n=7) ve %31.1 gebelik (n=28) dönemi şeklinde olmuştur. Hücrelerin tamnabilirliği; nukleus, çeper ve sitoplazmanın boya alma durumu; asidofili; bazofili; keratinizasyon; mukus ve lökositlerin seçilebilirliği gibi hücresel özel-liklerin belirlenmesi ve preparatların kalıcılığı kriterleri göz önüne alınarak yapılan değerlendirmede, toluidine blue yönteminin kul-lanılabilir bunun yanında Papanicolaou boyama yönteminin ise ideal sonuçlar verdiği saptanmıştır. Ayrıca, siklus dönemlerinin ta-nınmasında, toluidine blue yönteminin her örnekte yeterli olmadığı, Papanicolaou ile hazırlanan smearlerde ise farklı hücre tiplerinin diferensiyasyonu ile birlikte, oransal hücre verileri ve bunların yanında geçiş evrelerine ilişkin bilgilerin de elde edilebildiği so-nucuna varılmıştır. Ayrıca, vaginal smear yöntemiyle, luteal evre hücrelerinin görülmesi ile birlikte koyu yeşil renkli müköz plakların varlığına dayanarak, gebeliğe ilişkin fikir yürütmede etkili olabileceği de belirlenmiştir.