Inducible nitric oxide synthase expression in cerebellum of dogs naturally infected with canine distemper virus

Köpek gençlik hastalığı virusu ile doğal olarak enfekte köpeklerin serebellumunda indüklenebilir nitrik oksit sentaz ekspresyonu

Murat YARIM, Tolga GÜVENÇ, M.Yavuz GÜLBAHAR, Ayhan GACAR, M.Önder KARAYİĞİT, Yonca B. KABAK, Mahmut SÖZMEN

Abstract

The aim of this study is to investigate of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and nitrotyrosine (NT) expressionin the cerebellum of dogs naturally infected with canine distemper virus (CDV), a disease characterized by demyelination in thewhite matter of the cerebellum. Cerebellum samples collected from naturally infected twenty -three which were 14 acute and 9 chronically infected. with CDV and six non -infected dogs. The presence of CDV infection was confirmed using histopathology andimmunohistochemical localization of CDV antigen in glial cells of the white matter of the cerebellum. The CDV infected ce rebellawere also categorized Luxol Fast Blue staining according to the severity of demyelination as mild (n=7), moderate (n=9), and severe(n=7). The streptavidin -biotin -peroxidase technique was used to detect immunolocalisation of the CDV antigen, iNOS, NT and glialfibrillary acidic protein (GFAP). CDV antigens, immunopositive astrocytes, oligodendrocytes and granular neurons were seen in thewhite matter of the infected dogs. In the control dogs, iNOS and NT immunopositivity were not seen in the white m atter of the cerebellum. In CDV infected dogs, iNOS immunopositivity was observed especially in astrocytes in white matter of cerebellum. Thenumber of iNOS immunopositive astrocytes were significantly higher in chronic cases compared to acute case s of CDV infected dogs(p < 0.05). iNOS immunopositive gemistocytic astrocytes were also immunopositive for NT. iNOS and NT immunopositivity wasnot detected outside the region of the demyelinated areas. The iNOS immunopositive total cell number was found to be significantlyhigher in severely affected demyelination areas (p < 0.05). These data indicated that there was a relationship between degree s of theCDV associated with demyelination and the level of iNOS immunopositivity in the glial cells.

Özet

Bu çalışmanın amacı, köpek gençlik hastalığı virusu (KGHV) ile doğal olarak enfekte köpek serebellumlarının beyazmaddesinde demyelinasyonla karakterize alanlarda indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS) ve nitrotirozin (NT) ekspresyonunu nimmunohistokimyasal olarak incelenmesidir. Çalışmada, KGHV ile 14 adedi akut ve 9 adedi kronik olmak üzere toplam 23 adetdoğal enfekte ve 6 adet enfekte olmayan kontrol köpek serebellumu kullanıldı. KGHV enfeksiyonu histopatolojik ve immunohisto-kimyasal olarak serebellumun beyaz maddesindeki glial hücrelerde viral antije n varlığına dayanılarak doğrulandı. KGHV ile enfekteserebellumlar Luxol Fast Blue boyama ile demyelinasyonun şiddetine göre hafif (n=7), orta (n=9) ve şiddetli (n=7) olarak sınıflandı-rıldı. KGHV, iNOS, NT ve glial fibriler asidik proteinin (GFAP) immunpoz itifliği ve immunolokalizasyonunu belirlemek için stre p-tavidin -biotin -peroksidaz tekniği kullanıldı. KGHV immunopozitifliği enfekte köpek serebellumlarının beyaz maddesindeki astrosit-lerde, oligodendrositlerde ve granüler nöronlarda görüldü. Kontrol serebe llumlarda iNOS ve NT immun pozitifliğinin bulunmadığı,enfekte köpek serebellumlarında ise glial hücrelerde özellikle astrositlerde immunopozitiflik olduğu belirlendi. iNOS immunopozitifastrosit sayısının kronik olgularda akut olgulara göre önemli derecede yüksek olduğu saptandı (p