Localization of plasminogen activator inhibitor type 1 and 2 in preimplantation mouse development in vitro

Farelerde preimplantasyon embriyo gelişiminde plazminojen aktivatör inhibitör tip 1 ve 2'nin in vitro lokalizasyonu

Abstract

Plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) and type 2 (PAI-2) are the major endogenous inhibitors of fibrinolysis, or thrombolysis, as it is effective in blocking the conversion of plasminogen to plasmin. In mammalian embryos, both PAI-1 and PAI-2 proteins are expressed in the trophoblasts during and after implantation, suggesting their critical roles in implantation and placentation during pregnancy. However, it remains unclear how both proteins localize in the early stage embryos before implantation. In this study, 2 cell stage embryos were flushed from the oviducts and cultured to specified stages in medium at 37 ̊C in a 5% CO2 incubator. Embryos were fixed and double immunostained with anti-PAI-1 and anti- PAI-2 antibody. We determined the critical expression and localization patterns of PAI-1 and PAI-2 proteins in murine preimplantation embryos at 2 cell, 8 cell, morula and blastocyst stages by using confocal laser scanning microscope. We found that PAI-1 and PAI-2 constantly express in the embryos during preimplantation development, and these proteins localize in both the cytoplasm and the nucleus of each blastomere regardless of their developmental stage. Our results suggest that PAI-1 and PAI-2 proteins may play roles in early embryonic development before implantation.

Özet

Plazminojen aktivatör inhibitör tip 1 (PAI-1) ve tip 2 (PAI-2), plazminojenin plazmaya dönüşümünü bloke etmede etkili olduğundan fibrinolizis veya trombolizisin başlıca endojen inhibitörleridir. Memeli embriyosunda, hem PAI-1 hem de PAI-2 proteinlerinin implantasyon sırasında ve sonrasında trofoblastlarda eksprese ediliyor olması gebelikte bu proteinlerin implantasyon ve plasentasyonda kritik rolleri olduğunu düşündürmektedir. Bununla birlikte, her iki proteinin implantasyondan önce erken embriyo döneminde nasıl lokalize olduğu konusu hala açık değildir. Bu çalışmada, 2 hücre evrede bulunan embriyolar oviduktlar yıkanılarak çıkarıldı ve %5'lik CO2 inkübatöründe 37 ̊C 'de belirtilen aşamalara göre kültüre edildi. Embriyolar tespit edildi ve anti-PAI-1 ve anti-PAI-2 antikoru kullanılarak ikili immunboyama yapıldı. PAI-1 ve PAI-2 proteinlerinin murin preimplantasyon dönemi embriyolarındaki kritik ekspresyon ve lokalizasyon paternleri 2 hücre, 8 hücre, morula ve blastosist aşamalarında konfokal lazer tarama mikroskobu kullanarak belirlenmiştir. PAI-1 ve PAI-2'nin preimplantasyon gelişimi sırasında embriyolarda sürekli eksprese ettiğini ve bu proteinlerin gelişim aşamalarına bakılmaksızın her bir blastomerin hem çekirdeğinde hem de sitoplazmasında lokalize olduğu gösterilmiştir. Bu sonuçlar, PAI-1 ve PAI-2 proteinlerinin implantasyon öncesinde erken embriyo gelişimde rol oynuyor olabileceğini göstermektedir.