Partial purification of bovine kidney alanine aminopeptidase

Sığır böbrek alanin aminopeptidazının kısmen saflaştırılması, fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin araştırılması

Abstract

Bovine kidney alanine aminopeptidase was purified 121.67 fold and some ofits physicochemical and kinetic properties were investigated. The purification procedure included homogenization, ammoniuın sulphate precipitation and Sephadex G-200 gel filtration chro-matography. Kinetic studies of the partially purified enzyme revealed the Kın value for L-alanyl-b-naphthylamide to be 4x1 (r5 M. The enzyme had a pH optimum between 6 and 7.4, and optimum temperatures ranged from 37 to 50 °C. Subsequently, some effectors were tried and among them, cystein and feeric chloride were found to be inhibitory, while tetracycline did not show any effect on the enzyme activity. Cystein acted as a competetive inhibitör, whereas the inhibition kinetics of ferric chloride was not similar to any of the classical inhibition types.

Özet

Sığır böbrek alanin aminopeptidazı 121.67 kat saflaş-tırılarak, bazı fizikokimyasal ve kinetik özellikleri ince-lenmiştir. Saflaştırma işlemi, homojenizasyon, amon-yum sülfatla çöktürme ve Sephadex G-200jel filtrasyon kromatografisi basamaklarını kapsamaktadır. Kısmen saflaştırılan enzimle yapılan kinetik çalışma-lar sonucunda enzimin L-alanil-$-naftilamid için Km değeri 4x1 Cr5 M olarak belirlenmiştir. Enzimin fiziko-kimyasal özelliklerine ait deneyler sonucunda, opti-mum sıcaklık aralığı 37-50 °C, optimum pH aralığı ise 6-7.4 olarak bulunmuştur. Enzim üzerinde bazı efektörler de denenmiş, bunlar-dan sisteinin kompetetif inhibisyon yaptığı, ferrik klori-din de inhibitör olduğu ama inhibisyon tipinin klasik tiplere uymadığı, tetrasiklinin ise enzim aktivitesi üzeri-ne hiçbir etkisi olmadığı görülmüştür.