İnsan Akut Lenfoblastik Lösemi T-hücre Soyu Jurkat hücrelerinde LEF1, DHRS2 Gen Ekspresyonunu İndükler

SEMA SIRMA EKMEKCİ,Zeliha EMRENCE,NESLİHAN ABACI,Melda SARIMAN,Burcu SALMAN,Cumhur Gökhan EKMEKCİ,Çağrı GÜLEÇ

Abstract

Amaç: T-hücreli akut lenfoblastik lösemi (T-ALL), T-hücrelerinin gelişimini etkileyen genetik değişikliklerin birikmesinden kaynaklanan agresif bir hastalıktır. Bugüne kadar lymphoid enhancer-binding factor 1’in (LEF1) hem inaktive edici mutasyonları hem de aşırı ekspresyonu bildirildiğinden T-ALL gelişiminde rolü tartışmalıdır. Bu çalışmada, insan T hücreli lösemi hücre soyu olan Jurkat hücrelerinde LEF1’in potansiyel hedef genleri araştırıldı. Gereç ve Yöntemler: Jurkat hücrelerinde küçük engelleyici RNA (siRNA) teknolojisi ile LEF1 baskılandı ve mikroarray analizi ile LEF1 baskılanmış hücrelerdeki gen ekspresyon seviyeleri, negatif kontrol siRNA (hedefsiz siRNA) ile transfekte edilmiş hücrelerdeki gen ekspresyon seviyeleri ile karşılaştırıldı. Bulgular: LEF1 baskılanmış hücrelerde en önemli seviyede expresyonu azalan gen tümör baskılayıcı DHRS2 geni olarak belirlendi. Ayrıca bu bulgu hem mRNA seviyesinde gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR) ile hem de protein seviyesinde western blot ile doğrulandı. Sonuç: Bu bulgular DHRS2’nin Jurkat hücrelerinde LEF1 tarafından pozitif olarak düzenlendiğini göstererek LEF1’in tümör baskılayıcı kapasitesi olduğuna işaret etmektedir ve daha önceki çalışmalarda bildirilen sonuçlarla birlikte, LEF1’in hem onkojenik hedefleri hem de tümör baskılayıcı hedefleri aracılığıyla T-ALL’de düzenleyici bir rol oynadığını ileri sürmektedir.

Özet

Objective: T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressivedisease resulting from the accumulation of genetic changes that affectthe development of T-cells. The precise role of lymphoid enhancerbinding factor 1 (LEF1) in T-ALL has been controversial since bothoverexpression and inactivating LEF1 mutations have been reportedto date. Here, we investigate the potential gene targets of LEF1 in theJurkat human T-cell leukemia cell line.Materials and Methods: We used small interfering RNA (siRNA)technology to knock down LEF1 in Jurkat cells and then comparedthe gene expression levels in the LEF1 knockdown cells with nontargeting siRNA-transfected and non-transfected cells by employingmicroarray analysis.Results: We identified DHRS2, a tumor suppressor gene, as the mostsignificantly downregulated gene in LEF1 knockdown cells, and wefurther confirmed its downregulation by real-time quantitativepolymerase chain reaction (qRT-PCR) in mRNA and at protein level bywestern blotting.Conclusion: Our results revealed that DHRS2 is positively regulated byLEF1 in Jurkat cells, which indicates the capability of LEF1 as a tumorsuppressor and, together with previous reports, suggests that LEF1exhibits a regulatory role in T-ALL via not only its oncogenic targetsbut also tumor suppressor genes.