Journals / Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences / 2012 / Cilt: 12 - Sayı: 2
Tödürge Gölü (Sivas, Türkiye)’nde yaşayan Cyprinus carpio Linnaeus (1758)’nun karaciğerindeki lipaz’ın saflaştırılması ve karakterizasyonu
- Pages
- 207–215
- DOI
- —
Abstract
In this study, a lipase from the liver of Cyprinus carpio Linnaeus (1758) living in Tödürge Lake (Sivas) was purified with purification parameters of 90.38 μmol/dk.mg protein specific activity and 75.50 fold purity. The purification procedure consisted of preparation of homogenate, precipitation with polyethylene glycol-6000 (PEG-6000) and chromatographic techniques including in Q sepharose, sephacryl S 200 HR and phenyl sepharose CL-4B, respectively. The purified lipase showed a single band with approximately a molecular weight of 74 kDa by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). pH and temperature optimums for the purified enzyme were determined as 8.0 and 37°C using p-nitrophenyl butirate (p-NPB) as substrate. Km and Vmax values were found as 0.17 mM p-NPB and 2.6 μmol/ml.dk, respectively. It was observed that surface active agents, such as sodium dodecyl sulfate (SDS), Triton X-100 and Nataurocholate act as inhibitor on lipase activity.
Özet
Bu çalışmada, Tödürge Gölü’nde yaşayan Cyprinus carpio Linnaeus (1758)’nun karaciğerinden 90.38 μmol/dk.mg protein spesifik aktivite ve 75,50 katlık saflaştırma parametreleri ile bir lipaz saflaştırılmıştır. Saflaştırma prosedürü homojenatın hazırlanması, poletilen glikol-6.000 (PEG-6000) ile çöktürme ve Q sefaroz, sefakril S 200 HR, fenil sefaroz CL- 4B’yi kapsayan kromatografik tekniklerden oluşmuştur. Saflaştırılmış lipaz, sodyum dodesil sülfat-poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile yaklaşık 74 kDa’luk bir molekül ağırlığı ile tek bant göstermiştir. Optimum pH ve sıcaklık, substrat olarak p-nitrofenil butirat (p-NPB) kullanarak sırasıyla 8,0 ve 37°C olarak belirlenmiştir. Km ve Vmax değerleri, sırasıyla, 0,17 mM p-NPB ve 2,6 μmol/ml.dk olarak bulunmuştur. Sodyum dodesil sülfat (SDS), Triton X-100 ve Nataurokolat gibi yüzey aktif maddelerin lipaz aktivitesi üzerinde inhibitor olarak etki ettikleri gözlenmiştir.