Ca2+ Mobilizasyonu ve Akt İnhibisyonu ile PEO-1 Hücrelerinin Fibronektine Bağlanmasında Azalma

Calcium Mobilization and Inhibition of Akt Reduced the Binding of PEO-1 Cells to Fibronectin

Abstract

Amaç: Metastatik ovaryum kanser hücrelerinin fibronektine bağlanmasından sonra, hücre içi Ca2+ mobilizasyonu, β-katenin ve Akt sinyal yollarının etkilerinin araştırılmasıdır. Gereç ve Yöntemler: α4β1 ve αvβ6 integrinlerin ekspresyon düzeyleri α4, β1, αv vçe β6 antikorları kullanılarak akım sitometrisi ile PEO-1 hücrelerinde tespit edilmiştir. [Ca2+]’un hücre adezyon kapasitesine etkisi, PEO-1 hücrelerinin tapsigargin ve tunikamisin ile uyarılmasından sonra RTCA kullanılarak araştırıldı. PEO-1 hücrelerinin fibronektine bağlanma oranı β-kateninin toplanmasını inhibe eden farklı kardamonin konsantrasyonları varlığında veya PKB/Akt sinyal yolu için spesifik inhibitör olan FPA 124’ün farklı konsantrasyonları için RTCA kullanılarak araştırıldı. Bulgular: RTCA analiz sonuçları kalsiyum depolarından sızmasıyla artan [Ca2+]’un PEO-1 hücrelerinin fibronektine bağlanmasını güçlü bir şekilde etkilediğini göstermiştir. Hücre dışı kalsiyum akımı PEO-1 hücrelerinin bağlanmasını azaltmıştır. 100 µM kardamonin varlığında muamele edilmemiş kontrol hücrelerine göre hücrenin fibronektine bağlanması %64 oranında inhibe olmuştur. Son olarak, 15 µM FPA 124 ile PKB/Akt inhibisyonu da PEO-1 hücrelerinin fibronektine bağlanmasını %88 oranında düşürdüğü bulunmuştur. Sonuç: PEO-1 hücrelerinin integrinler aracılığı ile fibronektine bağlanmasının hücre içi Ca2+ mobilizasyonu ve Akt sinyali ile ilgili olabilir.

Özet

Objectives: To investigate the effects of intracellular calcium (Ca2+) mobilization, β-catenin and Akt signal pathways after the binding of metastaticovarian cells to fibronectin.Materials and Methods: The expression levels of α4β1 and αvβ6 integrin were determined using α4, β1, αv, and β6 antibodies using flow cytometryon PEO-1 cells. The effect of [Ca2+]i on cell adhesion capacity was investigated using RTCA after stimulating PEO-1 cells using thapsigargin andtunicamycin. The binding rate of PEO-1 cells to fibronectin was also investigated in the presence of either different concentrations of cardamonin,which inhibits the accumulation of β-catenin, or different concentrations of FPA 124, which is a specific inhibitor for the PKB/Akt signal pathway,using RTCA.Results: RTCA analysis results showed that increasing [Ca2+]i through leakage of the calcium pool was strongly effective on PEO-1 cell binding tofibronectin. Extracellular calcium influx also reduced the binding of PEO-1 cells. Cell binding to fibronectin was also inhibited with a ratio of 64%in the presence of 100 µM cardamonin compared with untreated control cells. Finally, it was found that PKB/Akt inhibition with 15 µM FPA 124decreased the binding of PEO-1 cells to fibronectin with a ratio of 88% compared with untreated control cells.Conclusion: PEO-1 cell binding to fibronectin via integrins could be related to intracellular Ca2+ mobilization and Akt signaling.