Sünnet Derisinden Kök Hücre Sferoidlerinin Elde Edilmesi ve Corchorus olitorius L.’nin Sferoid Proliferasyonuna Etkisi

Obtaining Stem Cell Spheroids from Foreskin Tissue and the Effect of Corchorus olitorius L. on Spheroid Proliferation

Eda BECER,Günsu SOYKUT,Hilal KABADAYI,Emil MAMMADOV,İhsan ÇALIŞ,Seda VATANSEVER

Abstract

Amaç: Mezenkimal kök hücreler kendi kendini yenileyebilme özelliğine sahiptir. Sünnet derisinin kök hücre kaynağı olarak kullanılma potansiyeli vardır. Çalışmanın amacı, yeni doğmuş insan sünnet derisi izole hücrelerinden (hnFSSCs) sferoid oluşumunu elde etmektir. Buna ek olarak, Kıbrıs’a özgü geleneksel bir bitki olan Corchorus olitorius L. (C. olitorius) bitkisinin hnFSSCs sferoidleri üzerindeki apoptotik ve proliferatif etkileri de araştırılmıştır. Gereç ve Yöntemler: Rutin sünnet prosedüründen sonra hücreler izole edildi ve uygun besi yeri ortamında kültüre edildi. Bitki yaprakları etanol ile ekstre edildi ve içerik analizi sıvı kromatografi-kütle spektrometresi (LC-MS/MS) yöntemi ile yapıldı. Sünnet derisi kök hücreleri CD45, CD34, CD90 antikorları kullanılarak immünositokimyasal olarak karakterize edilmiştir. hnFSSC sferoidleri asılı damla tekniği kullanılarak oluşturuldu. Elde edilen sferoidler daha sonra C. olitorius ekstraktı ile 48 saat süre muamele edildikten sonra kaspaz-3 ve Ki-67’nin dağıtımı için immünofloresan boyama yöntemiyle boyandı. Bulgular: İmmünoboyama analiz sonuçları, hnFSSC’lerin CD45, CD34 için pozitif fakat CD90 için negatif olduğunu gösterdi. LC-MS/MS sonuçlarına göre C. olitorius bitkisinin, flavanoller ve hidro-sinnamik asit türevleri içerdiği saptanmıştır. Elde edilen sferoidler gevşek ve yüzer vaziyette olmalarına rağmen hücreler birbirleri ile etkileşim halindeydi. Kaspaz-3 aktivitesi kontrol grubunda ekstrakt grubuna göre daha yüksekti ve ekstraksiyon uygulanan grupta Ki-67 aktivitesi kontrol grubuna göre daha yüksek bulundu. Bu sonuçlar, bitkinin polifenol içeriğinden dolayı kök hücre proliferasyonunu artırma kapasitesine sahip olabileceğini göstermektedir. Sonuç: hnFSSC’lerin ve sferoidlerin kök hücre üretimi ve doku onarımı ve yenilenmesinin bir parçası olarak kullanılabilme potansiyeli, sünnet derisinin kök hücre kaynağı olarak kullanılması durumunda mevcuttur. C. olitorius içerdiği polifenollerinden dolayı kök hücrelerin proliferasyonunu artıran etki göstermeyi başarmıştır.

Özet

Objectives: Mesenchymal stem cells are self-renewing stem cells. The human foreskin has potential to be used as a source of stem cells. The aimof the study was to obtain spheroid formation of human foreskin cells (hnFSSCs) isolated from newborn human foreskin tissue. In addition, theapoptotic and proliferative effects of a traditional plant, Corchorus olitorius L. (C. olitorius), on hnFSSC spheroids were investigated.Materials and Methods: After a routine circumcision procedure the cells were isolated and cultured in suitable medium. The plant leaves wasextracted with ethanol and their composition was analyzed by liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC-MS/MS). The foreskinstem cells were characterized immunocytochemically by CD45, CD34, and CD90 antibodies. hnFSSC spheroids were formed using the hangingdrop technique. Immunofluorescence staining was used on the obtained spheroids to determine the distribution of caspase-3 and Ki-67 after beingtreated with C. olitorius extract for 48 h.Results: Immunostaining analysis showed that hnFSSCs were positive for CD45 and CD34 and negative for CD90. According to LC-MS/MS C.olitorius was rich in flavanols and hydrocinnamic acid derivatives. Although the spheroids obtained were loose and floating, the cells interacted witheach other. Caspase-3 activity was higher in the control group than in the extract-treated group and Ki-67 was higher in the extract-treated groupthan in the control group, suggesting that the plant might have the capacity to increase stem cell proliferation due to its rich polyphenolic content.Conclusion: The results suggest that hnFSSCs and spheroids might be used in stem cell generation, tissue repair and renewal as human foreskintissue has potential to be used as a stem cell source. C. olitorius also increased proliferation of hnFSSCs, showing that polyphenols might increaseproliferation of stem cells.