Fare önmide karsinom hücreleri makrofajları TGF-β1 aracılığıyla immunosüprese etmektedir

Abstract

Background/aims: Peritoneal implantation metastasis of gastric cancer cells is associated with poor prognosis. Peritoneal macrophages are the most important immune cells in the abdominal cavity to control tumor metastasis. In the present study, the immunosuppressive effects of mouse forestomach cells on macrophages were examined. Materials and Methods: Conditioned medium from mouse forestomach cell cultures were used to treat isolated peritoneal macrophages. A colorimetry-based phagocytosis assay was performed to investigate the functional change of macrophages. The alternation in cytokine secretion by macrophages was measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Specific markers of macrophage polarization were analyzed by real-time reverse transcription polymerase chain reaction. The transforming growth factor-β1 signaling was evaluated by Western blotting. Neutralization experiments were performed by using transforming growth factor-β1 antibody. Results: The conditioned medium reduced the phagocytotic capability of macrophages. Lower tumor necrosis factor-α and interleukin-1β levels and higher interleukin-10 and vascular endothelial growth factor levels were observed. Real-time reverse transcription polymerase chain reaction showed increased mRNA levels of M2 macrophage markers. Further study revealed that transforming growth factor-β1 was significantly elevated in the conditioned medium and transforming growth factor-β1 signaling was activated in the macrophages with treatment with conditioned medium. Neutralization of transforming growth factor-β1 reversed the immunosuppressive effects on macrophages. Conclusions: Immunosuppressive macrophages can be induced by conditioned medium from mouse forestomach cell cultures. These effects seemed to be through the production of transforming growth factor-β1 by the tumor cells. Targeting transforming growth factor- β1 intervention might help in the control of peritoneal metastasis of gastric cancers.

Özet

Giriş ve Amaç: Mide kanser hücrelerinin peritoneal dökülme metastazı kötü prognozla ilişkilidir. Abdominal kavitede tümör metastazı nı önlemede en önemli immune hücreler peritoneal makrofajlardır. Bu çalışmada, fare önmide hücrelerinin makrofajlar üzerindeki immünosupresif etkisi araştırılmıştır. Gereç ve Yöntem: Fare önmide hücre kültürlerinden elde edilen şartlı ortam, izole peritoneal makrofajların üzerinde uygulandı. Makrofajların fonksiyonel değişikliklerini değerlendirmek için kolormetrik tabanlı fagositoz testi uygulandı. Makrofajlardan salınan sitokinlerin değişimi enzim bağlı immun test yöntemiyle test edildi. Makrofaj polarizasyonunun özgün belirteçleri, gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ile analiz edildi. Değiştirici büyüme faktörü-β1 sinyali, Western blot ile değerlendirildi. Nötralizasyon deneyleri, değiştirici büyüme faktörü-β1 antikoru kullanılarak yapıldı. Bulgular: fiartlı ortam, makrofajların fagositik kapasitesini azaltmıştı. Daha az tümör nekrozu faktörü-α ve interlökin-1β seviyeleri ve daha yüksek interlökin-10 ve vasküler endotelyal büyüme faktörü değerleri gözlenmişti. Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu, M2 makrofaj belirteçlerinin mRNA seviyelerinde artış gösterdi. leri analizde, şartlı ortamda değiştirici büyüme faktörü-β1in anlamlı derecede yüksek olduğu ve şartlı ortamla muamele edilen makrofajlarda değiştirici büyüme faktörü-β1 sinyalizasyonunun arttığı gösterildi. Değiştirici büyüme faktörü-β1in nötralize edilmesi, makrofajların üzerindeki immünosupresif etkiyi geri döndürmekteydi. Sonuç: Immünosupresif makrofajlar, fare önmide hücre kültürlerinden elde edilen şartlı ortam ile uyarılabilir. Bu etkiler, tümör hücrelerinden değiştirici büyüme faktörü-β1 üretilmesiyle ilgili görülmektedir. Değiştirici büyüme faktörü-β1in hedeflenmesi, mide kanserlerinin peritoneal metastazının kontrol edilmesine yardımcı olabilir.