1,25(OH)2 D3, Sistemik Lupus Eritematozus Hastalarında Nötrofil Hücre Dışı Tuzakları ile Endotel Apoptozunu Baskılar

1,25(OH)2 D3 Inhibits Endothelial Apoptosis by Neutrophil Extracellular Traps Externalization in Systemic Lupus Erythematosus Patients

Kusworini HANDONO,Benny Arie PRADANA,Radhitio Adi NUGROHO,Dian HASANAH,Handono KALIM,Agustina Tri ENDHARTI

Abstract

Giriş: Sistemik Lupus Eritematozus (SLE), Düşük Yoğunluklu Granülositlerin (DYG) varlığı ile karakterize çok karmaşık bir otoimmün hastalıktır. Bu DYGler, nötrofillerin hücre dışı tuzaklarını (NHT) oluşturma özelliğindedir. D vitamini düzeyleri ise, SLE’li hastalrda normal bireylerdekine göre daha düşük saptanmıştır. Bu çalışmada, Vitamin D [1,25 (OH)2 D3] seviyelerinin Vitamin D eksikliği olan SLE hastalarındaki DYG oluşturma endotel hücresi apoptozisi üzerine olan etkisini irdeledik. Gereçler ve Yöntemler: Beş SLE’li ve D vitamini eksiklği olan hastadan elde edilen nötrofiller, 1x10-9 M, 1x10-8 M, ve 10-7M 1,25 (OH)2 D3 verilen ve kontrol olarak ta hiç D vitamini uygulanmayan gruplara ayrıldı. Bu gruplardaki nötrofillerin NHT oluşturma özelliği irdelendi. NHT’nin arttırılmaya çalışıldığı bu deneylerden elde edilen hücre üstü sıvılar, insan göbek kordonu veni endotel hücreleri üzerine uygulandı. Histon ve defensin çıkarımı immünofloresan boyama tekniği ile araştırıldı. Endotel hücrelerinin apoptozu, akan hücre ölçeri ile değerlendirildi. Bulgular: Çalışmada, 1x10-8 M 1,25 (OH)2 D3 uygulanan nötrofillerin diğer gruplara göre daha az defendin ve histon çıkarımı yaptığı ve daha az endotel hücresi apoptozuna neden olduğu saptandı. Aynı zamanda, histon çıkarımı ile endotel hücresi apoptozu arasında bir bağıntı saptandı. Sonuçlar: D vitamini NHT oluşumunu azaltarak endotel hücresi hasarını azaltır.

Özet

Introduction: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a very complicated autoimmune disease which is characterizedby the presence of abnormal neutrophils known as Low Density Granulocytes (LDGs). These LDGs have increasedcapacity to produce Neutrophil Extracellular Traps (NETs). Vitamin D levels in SLE patients were significantly lowerthan that of healthy subjects. This study aims to investigate the effects of vitamin D [1,25 (OH)2D3] on NETosis andendothelial cell apoptosis in SLE patients with vitamin D deficiency.Materials and Methods: Neutrophils of five SLE patients with vitamin D deficiency were treated with four differentdoses of 1,25 (OH)2D3:0 M as a control, 1x10–9 M, 1x10–8 M, and 10–7M. Phorbol myristate Acetate (PMA) were givento induce production of NETs. The supernatant obtained from NETs induction was cocultured with Human UmbilicalVein Endodethial Cells (HUVECs). Histone and defensin externalization was investigated by immunofluorescencestaining. Endothelial apoptosis was investigated by flow cytometry.Results: This study shows that neutrophils treated with 1x10–8 M of 1,25 (OH)2D3 had significantly lower defensin,histone externalization, and endothelial cell apoptosis compared to those caused by other doses. There was alsoa positive correlation between histone externalization and endothelial apoptosis.Conclusion: Vitamin D inhibits endothelial damage by reducing the NETs development