Kondrosit proliferayonu için iki farklı in-vitro metod: Tavşan diz ekleminde deneysel çalışma

Two different in vitro methods for chondrocyte proliferation: An experimental study on rabbit stifle joint cartilage

Abstract

Unlike the other tissues of epithelial or mesenchymal origin, cartilage lacks the ability to replace damaged tissue with newly synthesized cells and extracellular matrix, to restore normal function. Therefore, advanced treatment methods are needed in cartilage tissue injuries. The purposes of the study were the enzymatic digestion and isolation of chondrocytes from biopsy materials and proliferation of cells in monolayer culture using two different in vitro methods, investigation of phenotypic characteristics and production of suitable chondrocytes to be used in transplantation and to be seeded on biodegradable, biocompatible, biomaterials. In this study, randomly chosen two study groups each consisting of 10 articular cartilage biopsy specimens which were formed and in these two groups, chondrocyte cultures in monolayer system were performed by using two different methods. The method used in the first group is similar to the ones noted in the literature. In the second group, however, a modified approach was performed; the cell isolation procedure was performed without using a magnetic stirrer, hyaluronidase and deoxyribonuclease. As a result it was found that there was no significant difference of proliferation rate and phenotypical characteristics in between these two study groups. It was clear that the method we used in the second group was satisfactorywith regard to isolation and production of cells in a healthy way only by using collagenase. It was concluded that this method should be used in the first step of cartilage tissue engineering.

Özet

Diğer epitelial ve mezenşimal dokulardan farklı olarak hasara uğramış kıkırdak dokusu, normal fonksiyonlarını yeniden kazanabilmek için, yeniden sentezlenen hücreler ve ekstrasellüler matriks ile onarım kabiliyeti zayıftır. Bundan dolayı, kıkırdak doku hasarları için ileri sağaltım metodlarına ihtiyaç duyulmaktadır. Bu çalışmanın amacı, kondros itlerin biopsi materyallerinden izolasyonu ve enzimatik digesyonu, iki farklı in vitro metodla monolayer hücre kültüründe hücre proliferasyonu, transplantasyon için kullanılacak olan uygun kondrositlerin üretilmesi ve fenotipik özelliklerinin araştırılmasıdır. Bu çalışma, 10'ar adet artiküler kıkırdak biopsi örneğini kapsayan rastgele seçilmiş 2 çalışma grubunda gerçekleştirildi. Monolayer sistemde kondrosit kültürleri 2 farklı metod kullanılarak yapıldı. Birinci grupta literatürlerde belirtilen klasik yöntem uygulandı, ikinci grupta, tarafımızdan modifıye edilen ve hücre izolasyonu için magnetik karıştırıcı, hyaluronidaz ve deoksiribonükleaz enzimleri kullanılmayan teknik uygulandı. Sonuç olarak, bu iki çalışma grubu arasında, proliferasyon oranı ve fenotipik " özellikler açısından belirgin bir fark olmadığı tespit edildi, ikinci gruptaki metodun, sadece kollagenaz kullanılarak, hücre izolasyonu ve üretimini sağlıklı ve tatminkar bir şekilde yapabildiği belirlendi. Sonuç olarak, kıkırdak doku mühendisliğinin ilk etabında bu metodun kullanılabileceği gösterilmiştir.