Expression of E-cadherin in Early Mouse Development

Abstract

E-cadherin is a member of the cadherin superfamily of calcium-dependent cell adhesion molecules, and has critical roles in cell adhesion during early embryo development. To determine the expression and distribution of E-cadherin, we applied immunofluorescent staining on late 8 cell, morula and blastocyst stage embryos during the experiments. Firstly, we superovulated the females and sacrificed them to isolate oviducts. We flushed 2 cell embryos by using FHM HEPES-buffered medium from the CD1 female mouse oviducts and cultured them in KSOM medium until the blastocyst stage. Embryos were fixed and immunostained with E-cadherin, then images were assessed using a fluorescence microscope. We demonstrate that E-cadherin is expressed throughout the late 8 cell to fully expanded blastocysts. We observed that E-cadherin is present only in the cell-cell contact sites and not in the apical sites of the membrane of late 8 cell stage embryo. In morula, E-cadherin localized on the surface of blastomeres and cell-cell junctions. In blastocyst stage, embryos showed membrane staining in cell-cell contact regions in trophectoderm cells while localized on the surface of inner cell mass. Our results indicate that E-cadherin mediated cell adhesion has major roles on compaction, trophectoderm epithelial differentation and implantation.

Özet

Kalsiyum bağımlı hücre adezyon moleküllerinden kadherin üst ailesinin bir üyesi olan E-kadherin’in erken embriyonik gelişim sırasında hücre adezyonunda kritik rolleri vardır. E-kadherin ekspresyonunu ve dağılımını belirlemek için, geç 8 hücre, morula ve blastosist aşamalarında bulunan embriyolara immünofloresan boyama uygulandı. İlk olarak dişi farelere superovulasyon uyguladıktan sonra sakrifiye edilerek oviduktar izole edildi. CD1 dişi farelerin oviduktları FHM HEPES-tamponlu medyum ile yıkanarak 2 hücreli embriyo elde edildi ve istenilen embriyo aşamalarında kullanılmak üzere KSOM medyumu içerisinde blastosist aşamasına kadar kültüre edildi. Embriyolar tespit edildi ve E-kadherin ile immun boyama yapıldıktan sonra, floresan mikroskobu kullanılarak görüntüler çekildi ve değerlendirildi. E-kadherinin geç 8 hücreli aşamadan tamamen genişletilmiş blastosist aşamaları boyunca eksprese edildiği gösterildi. Geç 8 hücreli embriyoda E-kadherin, membranın apikal bölgelerinde yer almazken sadece hücre-hücre temas bölgelerinde var olduğu gözlemlendi. Morulada E-kadherin, blastomerlerin yüzeyinde ve hücre-hücre birleşim alanlarında lokalize olduğu görüldü. Blastosist aşamasındaki embriyolarda, ICM'nin yüzeyinde lokalize olurken, TE hücrelerinde hücre-hücre temas bölgelerinde membran boyaması olduğu da gösterilmiştir. Sonuçlarımız, E-cadherin kaynaklı hücre adezyonunun, kompaksiyon, trofektoderm epitelyal farklılaşması ve implantasyon sürecinde önemli rollere sahip olduğunu göstermektedir.