Journals / Mikrobiyoloji Bülteni / 2002 / Cilt: 36 - Sayı: 2
Cloning and expression of HBcAg gene of Hepatitis B virus in eukaryoticcells
- Journal
- Mikrobiyoloji Bülteni
- Pages
- 183–191
- DOI
- —
Abstract
In the present study, cloning of hepatitis B core antigen (HBcAg) gene and expression of the gene in eukaryotic cells have" been reported. For this purpose, initially, HBcAg gene which was previously cloned into pUC19 plasmid, was excised by fcoRI ve Hind\\\ from this plasmid and inserted into an eukaryotic expression vector pcDNAS. Afterwards, the resulting recombinant plasmid (pcDNA-HBc) was transfected into Vero cells, and the stable transfected cells (Vero-HBc) were selected in geneticin containing culture medium. The presence of HBcAg gene in Vero-HBc cells were confirmed by polymerase chain reaction and, the expression of HBcAg gene by Vëro-HBc cells were tested in Western lmmunoblotting assay. As a result, a 21 kDa protein reacting with anti-HBc antibodies which Vero-HBc cells indeed expressed, were detected at the end of this assay.
Özet
Bu çalışmada, Hepatit B virüsünün kor antijeni (HBcAg) geninin genetik klonlanması ve ökaryotik hücrelerde ekspresyonu rapor edilmektedir. Bu amaçla ilk olarak, önceki çalışmalarımızda pUC19 plazmidine yerleştirilmiş olan HBcAg geni, bu rekombinant plazmit klonlarmdan EcoRI ve Hind\\\ restriksiyon enzimleriyle uzaklaştırılmıştır. Daha sonra, elde edilen HBcAg geni, ökaryotik ekspresyon plazmidi olan pcDNA3 içine yerleştirilmiştir. Oluşturulan rekombinant plazmit (pcDNA-HBc) ökaryotik Vero hücrelerine transfekte edilmiş ve plazmidini istikrarlı bir şekilde taşıyan hücre dizileri (Vero-HBc), genetisin içeren kültür vasatında seçilmiştir. Vero-HBc hücrelerinde HBcAg geninin varlığı polimeraz zincir reaksiyonu ile doğrulanmıştır. Vero-HBc hücrelerinde HBcAg proteinin ekspresyonu Western lmmunoblot deneyi ile test edilmiş ve bu yöntemle Vero-HBc hücrelerinde 21 kilodalton (kDa) büyüklüğünde HBcAg proteini belirlenmiştir.