Journals / Mikrobiyoloji Bülteni / 2007 / Cilt: 41 - Sayı: 1
Rapid purification of Bordetella pertussis fimbria 2,3 proteins and their immunogenicities
- Journal
- Mikrobiyoloji Bülteni
- Pages
- 11–20
- DOI
- —
Abstract
Bordetella pertussis fimbria antigens play an important role in the adhesion to the cell surfaces, and induce the formation of protective antibodies in the host. The aim of this study was to purify the fimbria proteins by a rapid and easy method which involved Superdex 75 gel filtration chromatography, and to investigate their immunogenicity. The fimbria proteins purified from the different strains showed single protein bands in 12.5% SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis) method. Depending on the strain used, the proteins were observed as Fim2 and Fim3 subunits or only Fim 2 subunit on 16% SDS-PAGE. The purified subunits were confirmed by Western and dot blotting analysis with monoclonal antibodies BP F2 (anti-Fim2) and BPC10 (anti-Fim 3). The immunogenicity studies performed in the mice revealed that purified fimbria proteins have led to higher agglutinin response than the vaccine with whole cell pertussis antigens. It was determined that the extent of agglutinin responses were different for different strains from which the fimbria proteins were purified. In addition, each B.pertussis strain showed a different agglutination reaction with different anti-Fim sera. The results, overall, pointed out the significance of fimbria structure of the B.pertussis strain used for vaccine manufacture and control.
Özet
Bu çalışmada, Bo rdete I la pertussis'm hücre yüzeyine adezyonunda rol oynayan ve konakta koruyucu antikor oluşumuna neden olan fimbriya antijenlerinin hızlı ve kolay bir yöntemle saflaştırılması ve immünojenitelerinin araştırılması amaçlanmıştır. Fimbriya antijenlerinin saflaştırmasında, yüksek basınç altında tek aşamada Superdex 75 jel filtrasyon kromatografisi yöntemi uygulanmıştır. Farklı suşlara ait saflaştırılan fimbriya proteinleri, %12.5 SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis) yönteminde tek protein bandı olarak gözlenmiştir. Suş farklılığı nedeniyle %16 SDS-PAGE'de bu proteinlerin bazıları iki alt birim (Fim2 ve Fim3), bazıları ise tek alt birim (Fim2) olarak belirlenmiştir. Saf fimbriya alt birimleri, monoklonal BP F2 (anti-Fim2) ve BP C10 (anti-Fim3) antikorları kullanılarak yapılan western ve dot blot analizleri ile doğrulanmıştır. Saflaştırılan fimbriya proteinleri ile farelerde yapılan immünojenite çalışmalarında ise, tam hücre bağışıklamasına göre çok yüksek oranda aglütinin yanıtı oluştuğu ve fimbriyanın izole edildiği susa göre bu immünojenik uyarının değiştiği belirlenmiştir. Aynı zamanda farklı B.pertussis suşlarının değişik anti-fimbriya serumları ile farklı reaksiyon gösterdiği gözlenmiştir. Bu sonuçlar, tam hücre ve hücresjz boğmaca aşılarının üretim ve kontrol çalışmalarında kullanılan B.pertussis susu ve fimbriya yapısının büyük önem taşıdığını ortaya koymuştur.