Comparison of Microdilution and Disk Diffusion Methods for the Detection of Fluconazole and Voriconazole Susceptibility Against Clinical Candida glabrata Isolates and Determination of Changing Susceptibility with New CLSI Breakpoints

Klinik Candida glabrata İzolatlarında Flukonazol ve Vorikonazol Duyarlılığının Saptanmasında Mikrodilüsyon ve Disk Difüzyon Yöntemlerinin Karşılaştırılması ve Yeni CLSI Direnç Sınır Değerleri ile Duyarlılık Sonuçlarındaki Değişimin Belirlenmesi

Abstract

Candida albicans is the most frequently isolated species as the causative agent of Candida infections. However, in recent years, the isolation rate of non-albicans Candida species have increased. In many centers, Candida glabrata is one of the commonly isolated non-albicans species of C.glabrata infections which are diffi cult-to-treat due to decreased susceptibility to fl uconazole and cross-resistance to other azoles. The aims of this study were to determine the in vitro susceptibility profi les of clinical C.glabrata isolates against fl uconazole and voriconazole by microdilution and disk diffusion methods and to evaluate the results with both the previous (CLSI) and current species-specifi c CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) clinical breakpoints. A total of 70 C.glabrata strains isolated from clinical samples were included in the study. The identifi cation of the isolates was performed by morphologic examination on cornmeal Tween 80 agar and assimilation profi les obtained by using ID32C (BioMérieux, France). Broth microdilution and disk diffusion methods were performed according to CLSI M27-A3 and CLSI M44-A2 documents, respectively. The results were evaluated according to CLSI M27-A3 and M44-A2 documents and new vs. species-specifi c CLSI breakpoints. By using both previous and new CLSI breakpoints, broth microdilution test results showed that voriconazole has greater in vitro activity than fl uconazole against C.glabrata isolates. For the two drugs tested, very major error was not observed with disk diffusion method when microdilution method was considered as the reference method. Since "susceptible" category no more exists for fl uconazole vs. C.glabrata, the isolates that were interpreted as susceptible by previous breakpoints were evaluated as susceptible-dose dependent by current CLSI breakpoints. Since species-specifi c breakpoints remain yet undetermined for voriconazole, comparative analysis was not possible for this agent. The results obtained at 24 hours by disk diffusion method were evaluated by using both previous and current CLSI breakpoints and the agreement rates for fl uconazole and voriconazole were 80% and 92.8% with previous CLSI breakpoint, 87.1% and 94.2% with new breakpoints, respectively. The high agreement rates between the two methods obtained by the new breakpoints in particular suggest that disk diffusion appears as a reliable alternative method in general for in vitro susceptibility testing of fl uconazole and voriconazole against C.glabrata isolates

Özet

Candida enfeksiyonu etkenleri içinde Candida albicans en sık izole edilen türdür. Ancak, son yıllarda albicans-dışı Candida türlerinin izolasyon oranı artmıştır. Pek çok merkezde Candida glabrata sıklıkla izole edilen albicans-dışı Candida türleri arasındadır. Flukonazol duyarlılığının azalmış olmasıve diğer azollere karşı çapraz direnç göstermesi nedeniyle C.glabrata enfeksiyonlarının tedavisi zordur. Bu çalışmanın amacı, klinik C.glabrata izolatlarının fl ukonazol ve vorikonazole in vitro duyarlılık profi linin sıvı mikrodilüsyon ve disk difüzyon yöntemleriyle saptanması ve sonuçların önceki ve yeni türe özgü CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) direnç sınır değerlerine göre değerlendirilmesidir. Çalışmaya, klinik örneklerden izole edilen 70 C.glabrata suşu alınmış ve izolatların tür düzeyinde tanımlanması, mısır unlu Tween 80 agardaki morfolojik görünüm ve ID32C (BioMérieux, Fransa) kullanılarak elde edilen asimilasyon profi llerine göre yapılmıştır. Sıvı mikrodilüsyon ve disk difüzyon yöntemleri, sırasıyla, CLSI M27-A3 ve M44-A2 kılavuzuna uygun olacak şekilde uygulanmıştır. Sonuçlar, CLSI M27-A3 ve M44-A2 kılavuzuna ve yeni türe özgü CLSI direnç sınır değeri önerilerine göre değerlendirilmiştir. Önceki ve yeni CLSI direnç sınır değerlerine göre sıvı mikrodilüsyon yöntemi ile duyarlılık sonuçları saptandığında, vorikonazolün C.glabrata izolatlarında in vitro olarak, fl ukonazolden daha etkin olduğu tespit edilmiştir. Disk difüzyon yönteminde önceki ve yeni direnç sınır değerleri ile elde edilen duyarlılık kategorileri, mikrodilüsyon yöntemi esas alınarak her iki ilaç için de karşılaştırıldığında, çok büyük hata saptanmamıştır. Yeni önerilen türe özgü direnç sınır değerlerinde fl ukonazol için "duyarlı" kategorisi olmadığından, önceki değerlendirmede duyarlı bulunan izolatlar, yeni sınır değerlere göre doza bağlı duyarlı olarak değerlendirilmiştir. Vorikonazol için ise henüz yeni türe özgü direnç sınır değerleri bulunmadığından, değerlendirme yapılamamıştır. Disk difüzyon yöntemi 24. saat sonuçları mikrodilüsyon yöntemi ile önceki ve yeni CLSI direnç sınır değerleriyle karşılaştırılmış, fl ukonazol ve vorikonazol için sırasıyla önceki direnç sınır değerleri ile %80 ve %92.8; yeni direnç sınır değerleri ile ise %87.1 ve %94.2 oranında uyum tespit edilmiştir. Yeni direnç sınır değerleri ile elde edilen ve önceki değerlere oranla daha yüksek bulunan uyum oranları, disk difüzyon yönteminin,C.glabrata izolatlarında fl ukonazol ve vorikonazol için in vitro duyarlılığın belirlenmesinde genelde güvenilir bir alternatif yöntem olduğunu düşündürmüştür