Molecular identification of Candida albicans and Candida dubliniensis strains isolated from clinical samples

Klinik örneklerden izole edilen Candida albicans ve Candida dubliniensis suşlarının moleküler olarak tanımlanması

Abstract

Candida dubliniensis is a recently identified opportunistic pathogen, which has close phylogenetic relation with Candida albicans. The aim of this study was the genotypic differentiation of 55 germ tube-positive Candida strains isolated from clinical specimens (30 blood, 25 throat swab specimens). The isolates were phenotypically identified by API ID 32C system, and genotypically identified by using poiymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method. Initially ITS2 region has been amplified by using universal fungal primers with PCR. After amplification and purification of approximately 340 base pair products, they were treated with species-specific restriction enzymes (MspA1 I and BsmAI for C.albicans and C.dubliniensis, respectively). As a result, API ID 32C system identified 52 (94.5%) isolates as C.albicans and 3 (5.5%) isolates as C.dubliniensis, whereas PCR-RFLP analysis yielded 50 (90.9%) C.albicans and 5 (9.1%) C.dubliniensis. It can be concluded that PCR-RFLP method may be used for the differentiation of C.dubliniensis and C.albicans isolates in clinical samples.

Özet

Candida dubliniensis, son yıllarda tanımlanmış olan ve Candida albicans ile filogenetik yakınlığı bulunan fırsatçı bir patojendir. Bu çalışmada, klinik örneklerden (30 kan, 25 boğaz sürüntüsü) izole edilen ve germ tüp oluşturan 55 Candida susunun tanımlanması ve genotipik olarak ayırt edilmesi planlanmıştır. Bu amaçla, fenotipik ayrım API ID 32C sistemiyle, genotipik ayrım ise polimeraz zincir reaksiyonu-restriksiyon parça uzunluğu çeşitliliği (PCR-RFLP) yöntemiyle yapılmıştır. Önce PCR yöntemiyle mantar rRNA'sına özgül evrensel primerler kullanılarak ITS2 bölgesi çoğaltılmış, daha sonra elde edilen yaklaşık 340 baz çiftlik PCR ürünü sataştırılarak C.albicans için özgül MspA1 I, C.dubliniensis için özgül SsmAl enzimleriyle kesilmiştir. Sonuç olarak, API ID 32C sistemiyle izolatların 52'si (%94.5) C.albicans, 3'ü (%5.5)C.dubliniensis olarak belirlenirken, PZR-RFLP yöntemiyle izolatların 50'si (%90.9)C.albicans, 5'i (%9A)C.dubliniensis olarak tanımlanmıştır. Bulgularımız, klinik örneklerden izole edilen C.albicans ve C.dubliniensis suşlarının ayırt edilmesinde PCR-RFLP yönteminin kullanılabilir olduğunu göstermektedir.

Keywords: Polimorfizm, kesim parçacığı uzunluk,Genotip,Polimeraz zincir reaksiyonu,Candida albicans