Determination of in vitro susceptibility of candida species to amphotericin B by E-test and previously proposed mic breakpoınts on two different media

Candida türlerinin amfoterisinin B'ye duyarlılığının E-test ve iki farklı besiyeri ile önerilmiş olan direnç sınır değerlerine göre araştırılması

Abstract

Although much work has concentrated on defining a reliable and reproducible method for determining in vitro susceptibility of Candida species to amphotericin B, there still has been limitations of the proposed techniques. In this study, amphotericin B minimal inhibitory concentrations (MIC) and susceptibility categories of 212 Candida strains (57 C.glabrata, 53 C.lusitaniae, 51 C.krusei and 51 C.tropicalis) were determined by E-test on RPMI agar (RPG) and antibiotic medium 3 agar (AM3) both supplemented with 2% glucose. The results were interpreted according to the proposed MIC breakpoints (>0.38 (xg/ml on RPG, >1 jig/ml on AM3) and discrepancies between susceptibility categories were investigated. While all Candida strains included in the study were determined to be susceptible on AM3 by amphotericin B E-test at 48h, 36.3% of the isolates were classified as resistant on RPG at 48 hours. On RPG, C.krusei strains showed the highest resistance rate (94.1% at 48 h), followed by C.tropicalis (35.3% at 48 h) and C.glabrata (17.5% at 48h). At 48h of incubation, 98.1% of C.lusitaniae isolates were found to be susceptible on RPG. The categorical agreement rates between the results obtained on two media and for C.lusitaniae and C.glabrata were 98.1% and 82.5% at 48 hours. For C.tropicalis and C.krusei, the rates of agreement were 64.7% and 5.9% at 48 hours. Conclusively, according to the previously proposed MIC breakpoints for amphotericin B E-test on RPG and AM3, discrepancies between susceptibility categories of Candida species were of remarkable significance.

Özet

Candida türlerinde amfoterisin B'ye in vitro direncin saptanması ile ilgili teknik sorunlar halen devam etmektedir. Bu çalışmada, 212 Candida suşuriun (57 C.glabrata, 53 C.lusitaniae, 51 C.krusei ve 51 C.tropicalis) amfoterisin B minimum inhibitor konsantrasyon (MİK) değerleri E-test yöntemiyle %2 glukozlu RPM11640 (RPG) agar ve %2 glukozlu antibiyotik medium 3 (AM3) ağarda saptanmış, önceden önerilmiş olan direnç sınır değerlerine göre (RPG ağarda >0.38 |a,g/ml, AM3 ağarda >1 |xg/ml) duyarlılık profilleri belirlenmiş ve her iki besiyerinde elde edilen duyarlılık kategorileri arasındaki uyum oranı hem tüm suşlar için hem de türe göre belirlenmiştir. Çalışmaya dahil edilen izolatların tümü E-test yöntemiyle 48 saat inkübasyonun ardından AM3 besiyerinde amfoterisin B'ye duyarlı bulunurken, RPG besiyerinde %36.3'ü amfoterisin B'ye dirençli bulunmuştur. RPG besiyerinde amfoterisin B'ye direnç oranı C.krusei izolatlarında %94.1, C.tropicalis izolatlarında %35.3, C.glabrata izolatlarında %17.5 olarak saptanırken, C.lusitaniae izolatlarının tamamına yakınının (%98.1) duyarlı olduğu belirlenmiştir. AM3 ve RPG ağarda elde edilen amfoterisin B duyarlılık profilleri arasında 48 saat inkübasyon sonrası C.lusitaniae ve C.glabrata izolatlarında sırasıyla, %98.1 ve %82.5 oranında uyum gözlenirken, uyumun C.tropicaiis'te %64.7, C.krusei'öe ise %5.9 olduğu görülmüştür. Bu bulgular, Candida suşlarında AM3 ve RPG ağarda amfoterisin B E-test için önerilen direnç sınır değerleri dikkate alınarak belirlenen duyarlılık profilleri arasında önemli ölçüde uyuşmazlıkların ortaya çıkabildiğini göstermiştir.