Evaluation of blood agar medium for the growth of Mycobacteria

Abstract

This study was aimed to evaluate the performance of blood agar for the growth of mycobacteria from clinical specimens sent to Mycobacteriology Laboratory of Samsun Chest Diseases Hospital. One hundred fifty six clinical specimens including 123 sputum, 28 bronchoalveolar lavage (BAL) and 5 pleural fluid specimens were inoculated in Löwenstein-Jensen (LJ), BACTEC MGIT 960 system (Becton Dickinson, USA) and blood agar following decontamination process. The specimens were also simultaneously examined for the presence of acid-fast bacilli (AFB). Thirty five mycobacteria strains (33 Mycobacterium tuberculosis and 2 atypical mycobacteria) grew in blood agar, 38 (36 M.tuberculosis and 2 atypical mycobacteria) in LJ media and 46 (44 M.tuberculosis and 2 atypical mycobacteria) in BACTEC MGIT 960 system. Among 29 AFB negative specimens, 20 revealed growth in both blood agar and LJ medium and 27 in MGIT system. AFB positive 20 samples yielded growth in 15 samples in blood agar, 18 in LJ medium and 19 in MGIT system. Among the total of 156 samples, contamination was observed in 15 (9.6%) samples in blood agar, 16 (10.2%) in LJ medium and 18 (11.5%) in MGIT system. Growth time was 5-35 days (mean 18 ± 7.4), 11-35 days (mean 19 ± 5.9) and 5-15 days (mean 10 ± 2.4) for blood agar, LJ medium and BACTEC MGIT 960 system, respectively. The three samples which revealed contamination in BACTEC MGIT 960 system, grew successfully in both blood agar and LJ medium without contamination. In one sample, growth was observed only in LJ medium but neither in blood agar nor BACTEC MGIT 960 system. However, in another sample, growth was observed only in blood agar while no growth was detected in LJ or BACTEC MGIT 960 system. Six samples yielded mycobacteria only in BACTEC MGIT 960 system. These results indicated that simultaneous use of one liquid and one solid medium to grow mycobacteria from the clinical samples seemed to be complementary. Blood agar was a promising choice since it was found to be as effective as LJ medium for the growth of mycobacteria, however, this issue needs to be further evaluated in a multicentre study with a larger specimen collection.

Özet

Bu çalışmada Samsun Göğüs Hastalıkları Hastanesi Mikobakteriyoloji Laboratuvarına gönderilen klinik örneklerden mikobakterilerin üretilmesinde kanlı agarın değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Çalışmaya, 123’ü balgam, 28’i bronkoalveoler lavaj (BAL) ve beşi plevral sıvı örneklerinden oluşan toplam 156 klinik örnek dahil edilmiştir. Örnekler dekontaminasyon işleminden sonra aside dirençli boyama (ARB) ile mikroskobik olarak incelenmiş ve eş zamanlı olarak Löwenstein-Jensen (LJ), BACTEC MGIT 960 (Becton Dickinson, ABD) ve kanlı agar besiyerine ekim yapılarak elde edilen veriler değerlendirilmiştir. Çalışmamızda 35 mikobakteri (33 Mycobacterium tuberculosis ve iki atipik mikobakteri) suşu kanlı agarda, 38 mikobakteri (36 M.tuberculosis ve iki atipik mikobakteri) suşu LJ besiyerinde ve 46 mikobakteri (44 M.tuberculosis ve iki atipik mikobakteri) suşu BACTEC MGIT 960 sisteminde üremiştir. ARB sonucu negatif olan 29 örneğin 20’sinde kanlı agar ve LJ’de, 27’sinde ise MGIT sisteminde üreme saptanırken; ARB pozitif bulunan 20 örneğin 15’inde kanlı agar, 18’inde LJ besiyeri ve 19’unda MGIT sisteminde üreme olmuştur. Toplam 156 örneğin 15 (%9.6)’i kanlı agarda, 16 (%10.2)’sı LJ besiyerinde ve 18 (%11.5)’i BACTEC MGIT 960 sisteminde kontaminasyonla sonuçlanmıştır. Üreme zamanları kanlı agar için 5-35 gün (ortalama 18 ± 7.4), LJ besiyeri için 11-35 gün (ortalama 19 ± 5.9) ve BACTEC MGIT 960 için 5-15 gün (ortalama 10 ± 2.4) olarak saptanmıştır. BACTEC MGIT 960 sisteminde kontamine olan üç örnekte, hem kanlı agar hem de LJ besiyerinde kontaminasyon olmadan üreme gözlenmiştir. Bir örnekte etken yalnızca LJ besiyerinde ürerken, kanlı agar ve BACTEC MGIT 960 sisteminde ürememiştir. Aynı şekilde bir diğer örnekte etken yalnızca kanlı agarda üremiş, LJ besiyeri ve BACTEC MGIT 960 sisteminde üreme olmamıştır. Altı klinik örnekte ise etken yalnızca BACTEC MGIT 960 sisteminde ürerken diğer iki besiyerinde üretilememiştir. Sonuç olarak, mikobakterilerin izolasyonunda katı ve sıvı besiyerlerinin beraber kullanımının birbirini tamamladığı izlenmektedir. Ayrıca mikobakterilerin üretilmesinde kanlı agar, en az LJ besiyeri kadar etkili gibi görünmekle birlikte, bu konuda daha fazla sayıda örnek ile yapılacak çok merkezli çalışmalara gereksinim vardır.