Evaluation of Enzyme Immunoassay (EIA), Immunoblot and HIV RNA Polymerase Chain Reaction Test Results in the Diagnosis of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Infection

İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü (HIV) Enfeksiyonu Tanısında Enzim ‘Immunoassay’ (EIA), İmmünoblot ve HIV RNA Polimeraz Zincir Reaksiyonu Test Sonuçlarının Değerlendirilmesi

Abstract

Acquired Immunodeficiency syndrome (AIDS) is an important global public health issue. Increasing HIV/AIDS cases reported each year has become a serious health problem for our country. The fourth generation enzyme immunoassay (EIA) test is the first step in the laboratory diagnosis of human immunodeficiency virus (HIV) infection. When the EIA test is repeatedly reactive, antibody-based tests such as immuno blot (IB), line immunoassay (LIA), HIV 1-2 antibody differentiation immunoassay, and HIV RNA tests for the early period of infection are used as confirmatory tests. The aim of this study was to evaluate the results of three different methods for the diagnosis of HIV infection. HIV 1-2 IB and quantitative HIV-1 RNA PCR tests were performed in 199 patient samples. These samples were detected as the reactive or gray zone with HIV 1-2 Ab+Ag EIA test between 2010 and 2015 at Akdeniz University Hospital, Microbiology Laboratory. HIV 1-2 Ab+Ag determination in serum samples was performed with the EIA method (Elecsys HIV combi PT test, Roche Diagnostics, Germany). A commercial kit (INNO-LIA HIV I-II Score, Innogenetics, Belgium) was used for HIV 1-2 IB method. The presence of HIV-1 RNA was investigated by automated nucleic acid extraction and real-time PCR method (Ampliprep/COBAS Tagman HIV-1 Test, Roche Diagnostics, Germany) in plasma samples. For statistical analysis, SPSS, Mann Whitney U test was used, ROC analysis was performed and p 10.000.000, > 10.000.000 and 5.040.000 copies/ml, respectively). For the kit that we used for HIV 1-2 Ab+Ag EIA COI ratio of >16.45 had a sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) of 97.6%, 98.1%, 97.6% and 98.1%, respectively for the detection of HIV infection (r= 0.994, p 10.000.000, 5.040.000 and > 10.000.000 copies/ml whose EIA tests were repeatedly reactive. HIV IB test was detected as the gray zone in one of them and as negative in the remaining two (HIV EIA S/CO values were 265, 9.5 and 131.8, respectively). These patients were diagnosed as acute HIV infection with clinical and laboratory findings. In conclusion, HIV RNA should also be performed and included in the diagnostic algorithm for acute HIV infection.

Özet

Kazanılmış immün yetmezlik sendromu (AIDS) önemli bir küresel halk sağlığı sorunudur. Her yıl bildirilen HIV/AIDS olgularının sayısı artmakta ve bu durum ülkemiz için önemli bir sağlık sorunu haline gelmektedir. İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV) enfeksiyonlarının laboratuvar tanısında ilk basamak olan dördüncü kuşak enzim “immunoassay (EIA)” testinin tekrarlayan şekilde reaktif bulunması halinde doğrulama testi olarak immünoblot (IB), “line immunoassay (LIA)”, HIV 1-2 antikor ayırt edici hızlı testler gibi antikora dayalı testler ve enfeksiyonun erken dönemi için HIV RNA saptayan testler kullanılmaktadır. Bu çalışmada, HIV enfeksiyonunun tanısında kullanılan üç farklı yöntemin sonuçlarının birlikte değerlendirilmesi ve yorumlanması amaçlanmıştır. Akdeniz Üniversitesi Hastanesi Merkez Laboratuvarında, Ocak 2010 ve Aralık 2015 tarihleri arasında HIV 1-2 Ab+Ag EIA test sonucu reaktif ya da gri zon olarak saptanan 199 hastaya ait örneklerde HIV 1-2 Ab IB ve kantitatif HIV-1 RNA polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) testleri çalışılmıştır. Serum örneklerinde HIV 1-2 Ab+Ag tayini elektrokemilüminesans EIA yöntemi (Elecsys HIV combi PT test, Roche Diagnostics, Almanya) ile yapılmış, HIV 1-2 IB yönteminde ticari bir kit (INNO-LIA HIV I/II Score, Innogenetics, Belçika) kullanılmıştır. HIV-1 RNA varlığı plazma örneklerinde otomatize nükleik asit ekstraksiyonu ve gerçek zamanlı PCR yöntemi (Ampliprep/COBAS Tagman HIV-1 Test, Roche Diagnostics, Almanya) ile araştırılmıştır. İstatistiksel analiz için veriler SPSS’ye kaydedilmiş, Mann-Whitney U testi kullanılmış ve ROC analizi yapılmıştır, p 10.000.000, > 10.000.000 ve 5.040.000 kopya/ ml). HIV 1-2 Ab+Ag EIA COI değerinin, kullandığımız kit için 16.45’ten büyük olmasının HIV enfeksiyonunu göstermede duyarlılığı %97.6, özgüllüğü %98.1, pozitif prediktif değeri (PPD) %97.6 ve negatif prediktif değeri (NPD) %98.1 olarak hesaplanmıştır (r= 0.994, p 10.000.000, 5.040.000 ve > 10.000.000 kopya/ml) saptanmıştır. Bu olgular klinik ve laboratuvar bulguları ile akut HIV enfeksiyonu tanısı almışlardır. Akut HIV enfeksiyonu düşünüldüğünde mutlaka HIV RNA’nın da çalışılması ve tanı algoritmasında yer alması gerekmektedir.