Bartonella henselae Infeksiyonunun Saptanmasında Kültür Sonrası PCR, Nested-PCR ve IFA Yöntemlerinin Karşılaştırılması

A Comparative Study on Detection of Bartonella henselae Infection by Culture Followed by PCR, Nested-PCR and IFA [1]

Abstract

Cats are the main reservoirs of zoonotic Bartonella henselae which are the causative agents of Cat Scratch Disease (CSD). The aim of this study is to compare three diagnostic methods including culture followed by PCR from whole blood, nested-PCR from oral swab and whole blood, and IFA from serum samples. The diagnosis of B. henselae was compared with the bacteriological methods following conventional PCR and by two separate nested PCR from blood, and oral cavity swabs which were collected from 81 pet and stray cats in Istanbul, Turkey. Also the seroprevalence was determined by indirect fluorescent antibody (IFA) technique in the same animals. Bartonella spp. was determined in 26 (32%) of the blood samples by culture. Twenty of them were identified as B. henselae and 6 of them were B. clarridgeiae by following conventional PCR assay. Of 81 whole blood samples subjected to PCR, 29 (36%) were positive in the nested reaction. Of these, 20 were identified as B.henselae and 8 were B. clarridgeiae. However, one of the samples was found to be positive for both B. henselae and B. clarridgeiae DNA by the nested reaction. Of 81oral swab samples subjected to PCR, 25 (31%) were positive in the nested reaction. Of these, 19 were identified as B. henselae and 6 were B. clarridgeiae. B.henselae IgG antibody seroprevalence was detected as 67% (54/81). Using the combination of blood and oral samples by Nested-PCR simultaneously may increase the sensitivity of the test. Also, the combination of the blood culture with nested- PCR and serology is likely to give the most definitive information in the diagnosis of bartonellosis in cats

Özet

Kediler kedi tırmalama hastalığının etkeni olan zoonoz Bartonella henselae bakterisinin ana rezervuarıdır. Bu çalışmanın amacı tam kandan kültür sonrası PCR, tam kan ve oral svaptan nested-PCR ve serum örneklerinden IFA yöntemlerini içeren 3 farklı teşhis yöntemini karşılaştırmaktır. B. henselae tanısı için İstanbul, Türkiye'de yaşayan 81 ev ve sokak kedilerinden toplanan kan örneklerinden bakteriyolojik kültürü takiben yapılan konvansiyonel PCR, tam kan örnekleri ve ağız boşluğundan alınan svapların 2 farklı nested PCR'I ile karşılaştırıldı. Ayrıca aynı hayvanlarda indirect floresan antikor (IFA) tekniği ile seroprevalance belirlendi. Kültür sonucunda 26 (32%) kan örneğinde Bartonella spp saptandı. Konvansiyonel PCR testleri sonucunda bunların 20 adeti B. henselae, altı adeti B. clarridgeiae olarak identifiye edildi. Nested PCR sonucu, 81 tam kan örneğinin 29'u (36%) pozitifti. Bunların 20 adeti B. henselae, sekiz adeti B. clarridgeiae olarak identifiye edildi. Aynı zamanda, 1 örnekte hem B. henselae hem de B. clarridgeiae identifiye edildi. PCR'ı yapılan 81 oral svabın 25'i (31%) nested PCR ile pozitif bulundu. Bunların 19 adeti B. henselae, altı adeti B. clarridgeiae olarak identifiye edildi. B.henselae'ya karşı oluşmuş IgG antikorlarının varlığı incelenen serum örneklerinde seroprevalans %67 (54/81) olarak belirlendi. Sonuç olarak kan ve oral svap örneklerinden Nested-PCR kombinasyonunun kullanımı testlerin sensitivitesini arttırabilmektedir. Ayrıca kan kültürünün nested-PCR ve seroloji ile kombinasyonu kedilerde bartonellosis tanısında muhtemelen en kesin bilgiyi vermektedir