Comparision of Three Phase Partitioning (TPP) and Convantional Enzyme Purifcation; Thermodynamic Parameters of β-Galactosidase Purifed by TPP

Üçlü Faz Ayrımı (ÜFA) ile Geleneksel Enzim Saﬂaştırma Tekniğinin Karşılaştırılması; ÜFA ile Saﬂaştırılan β-Galaktosidazın Termodinamik Özellikleri

Abstract

Enzymes have many industrial applications. Unfotunately purifcation cost restricts of using areaof this importatant biocataliyst. Recent years studies on enzyme purifcation is about reducing of purifcation costby reducing steps and time saving. Three phase partitioning (TPP) is important purifcation method. TPP uses tbutanol and ammonium sulfate to precipitate enzymes and proteins from aqueous solution. The simplicity of themethod combined with its rapid result make this a popular choice in large scale protein purifcation. In this studythermodynamic parameters of β-Galactosidase as ΔG#, 62.21 kJ mol-1; Δ#E-T, -13.56 kJ mol-1; Δ#E-S, 0.25 kJ mol-1;ΔH#, 26.06 kJ mol-1; ΔS#, -0.12 kJ mol-1K-1 which was purifed by TPP

Özet

Enzimlerin yaygın endüstriyel kullanımları mevcuttur. Ancak bu önemli biyokatalizörlerin saﬂaştırmamaliyetleri kullanım alanlarını kısıtlamaktadır. Son yıllarda yapılan çalışmalar enzimlerin saﬂaştırmabasamaklarını düşürerek maliyet ve zaman tasarrufu yapmak yönündedir. Bu amaçla Üçlü faz yöntemi (ÜFA)ile enzim saﬂaştırması önemli bir yöntemdir. Hedef enzim Üçlü faz yönteminde t-bütanol ve amonyum sülfat ilekullanılarak enzim çözeltisi tuzlu ara fazda çöktürülür. Metodun basitliğinin yanı sıra hızlı sonuç vermesi ve düşükmaliyeti endüstriyel kullanımını cazip hale getirmektedir. Bu çalışmada enzimlerin geleneksel yöntemler ile ÜFAsaﬂaştırılma protokolleri karşılaştırılarak yöntemlerin birbiri üzerine üstünlükleri tartışıldı. Aynı zamanda ÜFAYöntemi ile saﬂaştırılan β-galaktosidaz enziminin termodinamik özellikleri ve ΔG#, 62.21 kJ mol-1; Δ#E-T, -13.56 kJmol-1; Δ#E-S, 0.25 kJ mol-1; ΔH#, 26.06 kJ mol-1; ΔS#, -0.12 kJ mol-1K-1 olarak hesaplandı.