Kainik Asit ve MPP+ GLT-1’in İfade Artışını Neuroblastoma ve Glia Hücrelerinde Düzenler

Kainic Acid and MPP+ Induce Upregulation of GLT-1 in Neuroblastoma and Glia Cells

Abstract

Amaç: Glutamat, beyindeki majör uyarıcı transmiterdir. Fazla glutamat eksitotoksisiteye yol açar. GLT-1 (Glutamat Transportır 1) beyindeki glutamatın %95’ini temizleyerek nöron fonksiyonunu sağlar ve eksitotoksisiteyi önler. Bu çalışmada kainik asit and MPP+ (1-methyl-4-phenylpyridinium) isimli iki toksinin nöroblastoma ve glia (immortalize edilmiş insan astrositleri) hücrelerinde GLT-1 ve eksitotoksisite üzerindeki etkilerini incelemektir. Yöntemler: Nöroblastoma ve glia hücreleri kainik asit ve MPP+ ile muamele edilip hücre canlılığını ölçüldü. GLT-1’in mRNA ve protein ifadesi tespit edildikten sonra glutamat assay ile birikmiş Glutamate miktarı belirlendi. Bulgular: GLT-1’in mRNA seviyesi kainik asit ve MPP+ ile muamele sonucu nöroblastoma ve glia hücrelerinde artmıştır. GLT1’in protein seviyesi de glia hücrelerinde MPP+ muamelesi sonucu artmıştır. Salınan glutamatın 12 saatlik MPP+ muamelesinden sonra azaldığı gözlenmiştir. Ancak bu azalış daha sonra geçerli olmamıştır. Sonuç: Bulgularımız göstermektedir ki GLT-1 ifadesi kainik asit veya MPP+ muamelesi sonucu yaşamsal bir mekanizma olarak eksitotoksisiteyi önlemek için artmaktadır.

Özet

Objective: Glutamate is the major excitatory transmitter in the brain. The excessive glutamate will lead to excitotoxicity. Glutamate transporter-1 (GLT-1) is the major transporter that performs 95% of the glutamate clearance contributing to normal neuronal function and preventing excitotoxicity. In this study, we investigated the effect of two toxins, kainic acid and MPP+ (1-methyl-4- phenylpyridinium), on GLT-1 expression and excitotoxicity in neuroblastoma and glia cells (immortalized human astrocytes). Methods: We treated neuroblastoma and glia cells with kainic acid and MPP+ , applied MTT assay to measure the cell viability. We identified the mRNA and protein levels of GLT-1 and also analyzed released glutamate levels using glutamate assay. Results: The mRNA level of GLT-1 increased in neuroblastoma cells as a result of kainic acid or MPP+ treatment while the protein expression of GLT-1 increased in glia cells after the treatment with MPP+ . Excess glutamate was found to be decreased after 12 h MPP+ treatment. However, this decrease was no more prominent with further MPP+ treatment. Conclusion: Our results show that GLT-1 levels are elevated as a result of kainic acid or MPP+ treatment as a survival mechanism to prevent excitotoxicity.