Erken Osteojenik Farklılaşma (In Vitro) Süresince Wistar Sıçanlarda (Rattus novergicus) Gingival Medicinal Signaling Hücrelere Post Trombositten Zengin Fibrin Uygulamasının Agrekan Ekspresyonuna Etkisi

The Aggrecan Expression Post Platelet Rich Fibrin Administration in Gingival Medicinal Signaling Cells in Wistar Rats (Rattus novergicus) During the Early Osteogenic Diffrentiation (In Vitro)

Alexander Patera NUGRAHA,Ida Bagus NARMADA,Diah Savitri ERNAWATI,Aristia DINARYANTI,Eryk HENDRIANTO,Igo Syaiful IHSAN,Wibi RIAWAN,Fedik Abdul RANTAM

Abstract

Trombositten Zengin Fibrin (TZF) büyüme faktörlerince zengin olup Gingival Medicinal Signaling Hücreleri (GMSH)’nin (GMSH) osteojenik farklılaşmasını geliştirebilir. Agrekan, kondrojenik farklılaşma markırı olup GMSH’nin osteojenik farklılaşmasının erken evrelerinde önemli bir rol oynamaktadır. Bu çalışma, TZF uygulaması sonrasında in vitro osteojenik farklılaşmada Agrekan ekspresyonunu araştırmayı amaçlamaktadır. Bu araştırma, post-test sadece kontrol grup dizayn kullanan rastgele örneklemeli gerçek bir deneysel çalışmadır. Yaklaşık 250 gram gelen bir aylık sağlıklı erkek Wistar sıçanların (Rattus novergicus) (n=4) alt gingival dokularından GMSH izole edildi, sonrasında 2 hafta kültüre edildi ve 4-5 gün pasajlandı. 3-5. pasajlarda GMSH, beş M24 besiyeri içerisinde 7, 14 ve 21 gün boyunca üç farklı kültür medyumunda (α Modified Eagle Medyum içeren negatif kontrol grubu, osteojenik medyum katkılı High Glucose-Dulbecco’s Modified Eagle Medyum (DMEM-HG) içeren pozitif kontrol grubu, hem osteojenik medyum hem de TZF katkılı DMEM-HG içeren uygulama grubu) kültüre edildi. Tek yönlü varyans analizi (ANOVA) testi uygulandı (P<0.05). Uygulama grubu 16.15±2.15 ile 7. günde en yüksek Agrekan ekspresyonu gösterdi. En düşük Agrekan ekspresyonu, 3.67±0.76 ile 21. günde negatif kontrol grubunda meydana geldi. Gruplar arasında Agrekan ekspresyonu bakımından anlamlı derecede farklar bulunmaktaydı (P<0.05). TZF uygulaması osteojenik farklılaşma süresince GMSH’nin Agrekan ekspresyonunu umulmadık bir şekilde uyarmaktadır ve bu nedenle kemik remodelleme veya neo-kartilaj oluşumunun hızlandırılmasında faydalı olabilir.

Özet

Platelet Rich Fibrin (PRF) is rich for growth factors which can improve the Gingival Medicinal Signaling Cells’ (GMSCs) osteogenic diffrentiation. Aggrecan is chondrogenic diffrentiation marker which has a significant role in the early stage of GMSCs’ osteogenic diffrentiation. This study aimed to analyze the expression of Aggrecan post PRF administration on the osteogenic diffrentiation in vitro. This research is a true experimental study using the post-test only control group design with a simple random sampling. GMSCs were isolated from the lower gingival tissue of healthy male Wistar rats (Rattus novergicus) (n=4), weighted around 250 g, a month old, then cultured for 2 weeks and passaged for 4-5 days. GMSCs in the passage 3-5 were cultured in five M24 plates (N=54; n=6/group) for 7 days, 14 days, and 21 days in three diffrent culture mediums, they were negative control group which included α Modified Eagle Medium; positive control group which contained High Glucose-Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEMHG) combined with osteogenic medium; and at last, treatment group which were DMEM-HG combined with both osteogenic medium and PRF. A one-way Analysis of Variance (ANOVA) test (P<0.05) was performed. The treatment group showed the highest Aggrecan expression of 16.15±2.15 on the 7th day. The lowest Aggrecan expression with a value of 3.67±0.76 on the 21 th day occurred in the negative control group. There was a significant diffrence of Aggrecan expression between groups (P<0.05). PRF administration unexpectedly stimulates Aggrecan expression of GMSCs during the osteogenic diffrentiation that useful to accelerate the bone remodeling or neo-cartilage formation.