AI Summary & Key Takeaways
AI InsightThe studies are focused on the C-inteins due to their recepient abilities of the amino acid additions
📌 3 Key Takeaways
Abstract
In this review study, conducted researches on inteins and recombinant proteins to increase splitting activity of inteins that are utilised in recombinant protein purification processes without use of protease have been investigated. Researches on protein cleaving by use of inteins are aimed to make inteins and protein purification processes become more effective. The processes are accomplished in vivo and in vitro and intein and target protein included polyclonal Polymerase Chain Reaction (PCR) products are cloned than the expressed plasmids are fused to cloned strains. Kinetics of activity of cleaving and activity of cleaving rates were determined in different pH, temperature and filtration times. In the completed researches, protein cleaving activities of different microbial natural and engineered inteins have been investigated and among them the cleaving activity of recombinant Nostoc punctiforme (Npu) DnaE C-inteins were found to be very high. The studies are focused on the C-inteins due to their recepient abilities of the amino acid additions
Özet
Bu derleme çalışmasında, yeniden birleştirilmiş proteinlerin proteaz kullanılmadan saflaştırılması süreçlerinde yararlanılan inteinlerin ayrılma etkinliklerinin artırılması için inteinler ve hedef proteinler üzerinde yapılmış araştırmalar incelenmiştir. İntein kullanımı ile protein ayrışması üzerinde yapılan araştırmalar, intein ve protein saflaştırma süreçlerinin daha verimli hale getirilmesini amaçlamaktadır. In vivo ve in vitro olarak gerçekleşen süreçlerde, intein ve hedef protein içeren poliklonal Polimeraz Zincir Tepkimesi (PZT) ürününün çoğaltılması ve ekspres plazmidlerin kopyalanan suşlara taşınması işlemleri yapılmaktadır. İnteinin proteinden ayrılma etkinliği ve ayrılma oranı sabiti kinetikleri, değişik pH, sıcaklık ve süzme sürelerinde belirlenmekte ve hedef proteinlere ilişkili olarak karşılaştırılmaları yapılmaktadır. Araştırmalarda değişik doğal ve yapay inteinlerin protein ayrıştırma etkinlikleri incelenmiş ve yapay Nostoc punctiforme (Npu) DnaE C-inteinlerinin ayrışma etkinliklerinin en yüksek olduğu belirlenmiştir. Çalışmalar amino asit eklenmesine daha yatkın olması nedeniyle Cinteinler üzerinde yoğunlaşmaktadır