Siirt Tiftik Keçisi Böbrek Dokusundan Karbonik Anhidraz Enziminin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Bazı Biyokimyasal Özelliklerinin Araştırılması

Özet

Karbonik anhidrazlar (CA) (E.C:4.2.1.1) bakteri gibi en basit organizmalardan bitki ve hayvan gibi en kompleks canlılara kadar yaygın şekilde dağılmış çinko içeren bir grup metaloenzimdir. CA inhitörleri köpek ve kedilerin glukoma tedavisinde kullanılan başlıca ilaçların birkaçıdır. CA enzimleri daha önceki çalışmalarda afinite kromatografisi yöntemi ile başarılı bir şekilde koyun, tavuk, balık ve sığır gibi pekçok canlıdan saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir. Bu çalışmada ise CA enzimi, Siirt Tiftik Keçisi böbrek dokusundan Sepharose-4B-L-tirozin-sülfanilamid afinite kolonu kullanılarak 902,9 EU x mg -1 spesifik aktivite ile % 50,19 verimle 83,54 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin saflığı SDS-PAGE ile doğrulandı. Tris-HCI tamponu kullanılarak enzimin optimum iyonik şiddeti 25 mM olarak belirlendi. Enzimin optimum pH‘sı pH=8,5 olarak belirlendi. Enzimin optimum sıcaklığı 45 ºC olarak bulundu. Siirt Tiftik Keçisi böbrek CA enzimi için stabil pH=7,0 olarak belirlendi. Saflaştırılan CA enzimi üzerine bazı metal iyonlarının inhibitör etkileri incelendi. İnhibisyon gösteren metallerin IC 50 değerlerini bulmak amacıyla inhibisyon grafikleri çizildi.