RUSSULA DELICA FR.’NİN SİTOTOKSİTE, APOPTİK VE NEKROTİK ETKİLERİ

Özet

Russula delica Fr.’nın sitotoksite, apoptik ve nekrotik etkileri incelenmiştir. Kuru basidiokarplardan alınan parçalar malt ekstrakt agarda doku kültürü yöntemiyle geliştirildi. Sırasıyla primer ve sekonder miseller 27°C’de, karanlıkta, 10 gün süreyle inkübe edildi. Sekonder misellerden 3’er pelet nutrientbroth’da 27°C’de, 140 rpm’de 7 günde gelişimini tamamladı. Numuneler soxlet cihazında 80°C, %70’lik etil alkolde 1 saat ekstraksiyon edilerek sitotoksite, apoptik ve nekrotik çalışmalar için hazırlandı. Sitotoksite çalışmalarında, ekstrakt MCF-7 ve L929 Fibroblast hücrelere örnek konsantrasyonları 5mg/ml, 2,5mg/ml, 1.25mg/ml, 0.625mg/ml, 0.315mg/ml olarak uygulandı. WST-1 solüsyonu eklenerek inkübasyon sonucunda 440nm dalga boyunda mikroplate okuyucuda absorbans ölçümü yapıldı. İkili boyama deneyi ile aynı hücre hattında apoptoz ve nekroz belirlendi. İkili boyama solüsyonu hazırlanarak MCF-7 ve L929 Fibroblast hücrelere aynı konsantrasyonlarda uygulandı. İnkübasyon sonucunda florasanataçmanlı mikroskop FITC ve DAPI filtresinde 20X büyütmede ölçüm yapıldı. Toksite, konsantrasyonlara bağlı olarak değişmektedir. 5mg/ml de hazırlanan örnekte toksite oranı yüksektir. 2.5mg/ml altında hazırlanan miktarlar arasında bir fark yoktur. Ayrıca kanser ve normal hücrelerin canlılık değerleri arasında anlamlı bir fark gözlemlenmemiştir. Örneklerde herhangi bir apoptik ve nekrotik etki gözlemlenmemiştir.