Preparatif HPLC Yöntemiyle Yüksek Saflıkta Alfa Amanitin Saflaştırılması

Özet

Amaç: Alfa amanitin mevcut yöntemlerle ancak %90 civarında saflık oranında saflaştırılabilmektedir. Bu araştırmada yüksek saflıkta alfa amanitin elde etmek için preparatif HPLC kullanılarak uygulanan yöntemin tanımlanması amaçlanmıştır. Metod: Amanita phalloides mantarları toplandı, ekstrakte edildi, 2 defa preparatif HPLC ile saflaştırma işlemi uygulandı. Toksinin doğrulaması analitik HPLC’ deki tutulma zamanı ve ultraviyole spektrumu karşılaştırılması yöntemleriyle yapıldı. Bulgular: 1. saflaştırma işlemi sonrasında elde edilen alfa amanitin saflık oranı %93 (±1,24) olarak bulundu. 2. saflaştırma işlemi sonrasında elde edilen alfa amanitin saflık oranı %99,8 (±0,26) olarak bulundu. Elde edilen toksin ile standardın UV spektrumlarında her ikisinde de 303 nm’de maksimum, 263 nm’de minimum absorbans verdiği ve spektrum yapısının aynı olduğu görüldü. Sonuç: Tanımladığımız bu yöntemle, >%99 saflıkta alfa amanitinin uygun maliyetle elde edilmesi mümkündür