Türkiye'de İnsan Fasciola hepatica İzolatının Moleküler Karakterizasyonu

Özet

Fasciola hepatica, hem hayvanları hem de insanları enfekte eden, önemli patolojilere ve ekonomik kayıplara sebep olan bir karaciğer trematodur. Günümüze kadar daha çok morfolojik olarak tanımlanan parazit, son yıllarda ara Fasciola formlarının bulunmasıyla birlikte moleküler olarak karakterize edilmeye çalışılmıştır. Ülkemizde hem hayvanlarda hem de insanlarda saptanan F. hepatica'nın hayvan izolatları moleküler olarak tanımlanmasına rağmen bugüne kadar insan izolatlarının moleküler karakterizasyonu yapılmamıştır. Bu çalışmada F. hepatica insan izolatının moleküler karakterizasyonu amaçlanmıştır. Bu amaçla; Kayseri'de insan safra yollarından çıkarılan erişkin F. hepatica'dan elde edilen genomik DNA'dan PCR ile ITS-2 bölgesine spesifik primerler kullanılarak PCR ürünü elde edilmiştir. Agaroz jelde görüntülenen DNA, jelden Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System kullanılarak saflaştırılmış ve DNA dizi analizi yaptırılmıştır. DNA dizi analiz sonucu, BLAST analizi ve MEGA program ile filogenetik analiz yapılarak değerlendirilmiştir. Genomik DNA'dan 510 bp'lik PCR ürünü elde edilmiştir. DNA dizisi saptanan insan F. hepatica izolatının, BLAST ve filogenetik analiz sonucunda Türkiye'den bildirilen hayvan izolatlarıyla benzer olduğu belirlenmiştir. Fazla sayıda insan ve hayvan F. hepatica izolatlarıyla ve ITS2 dışında diğer genetik markerlerle desteklenmesi gereken bu çalışma sonucunda; Türkiye'de ilk kez bir insan F. hepatica izolatının moleküler karakterizasyonu yapılmıştır

Abstract

Fasciola hepatica is a liver trematoda that infect both humans and animals, causing significant pathology and economic losses. They can generally be distinguished on the basic of their morphology. F. hepatica is determined both in animals and humans in our country. To date although animal isolates of F. hepatica was described the characterization of molecular human isolates have not been performed. The aim of this study was to identify and characterization of human isolate of F. hepatica in Turkey. Genomic DNA from adult F. hepatica derived from human biliary duct in the Kayseri was extracted using the Wizard Genomic DNA Purification kit according to the manufacture's instructions. DNA was amplified using ITS-2 targed primers. PCR products were visualized on 1.5% agarose gel containing ethidium bromide. The fragments of amplified DNA were approximately 500-510 bp long. PCR products were purified using the Wizard SV Gel and PCR Clean-Up System. Nucleotide sequence analysis was undertaken by BLAST algorithms and multiple sequence alignments were made with the ClustalW method, with MEGA5 and compared with sequences retrieved from GenBank. As a result, BLAST and Phylogenetic analyses of DNA isolation, announced from Turkey, were found to be similar to other animal isolates. This is first study to characterization of human isolate of F. hepatica in Turkey. We consider that the study should be supported by more human isolates of F. hepatica and other genetic markers