Dergiler / Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi / 2021 / Cilt: 27 - Sayı: 6
İntrasitoplazmik Sperm Enjeksiyonu (ICSI) İle Üretilen Taze Embriyodave Vitrifiye Embriyoda Kalsiyum ($Ca^{2+}$) Salınımları ve Yoğunluğu
- Sayfa
- 787–793
- DOI
- —
Özet
Bu çalışma, Intra-Sitoplazmik Sperm Enjeksiyonu (ICSI) yöntemi ile üretilen embriyoların hücre içi kalsiyum profilini ve canlılığını belirlemeyi amaçlamıştır. Çalışmada 2 grup vardı (T1: taze embriyolar, T2: vitrifikasyon sonrası embriyolar). Çalışma, besiyeri hazırlama, keçi oositlerinin toplanması, Kacang keçi oositlerinin in vitro olgunlaştırılması, ICSI yöntemi kullanılarak embriyoların döllenmesi ve taze embriyoların ve vitrifiye embriyoların birim zamanda (sn) kalsiyum ($Ca^{2+}$) yoğunluk profillerinin incelenmesi aşamalarını içermiştir. $Ca^{2+}$ yoğunluğu, timelapse Lazer Taramalı Konfokal Mikroskobu (CLSM) kullanılarak 3 bölgede, bölge 1: kenar, bölge 2: orta ve bölge 3: embriyo numunesinin kenarı, gerçekleştirildi. Döllenen embriyolardan, T1’in ortalama kalsiyum yoğunluğu 334.62±8.60 ve T2’nin 408.2±13.67 olarak saptandı. Vitrifikasyon sonrası embriyolardaki $Ca^{2+}$ yoğunluğu, taze embriyolardakinden daha yüksekti. Taze embriyolarda $Ca^{2+}$ salınımlarının 50 sn’lik aralıktaki ölçümleri uyumluyken, vitrifikasyon sonrası embriyolarda 10 sn, 20 sn öncesi ve 50 sn’lik son aralıklara ait yoğunluklar uyumlu değildi. Vitrifikasyon sonrası embriyolardaki $Ca^{2+}$ yoğunluğunun taze embriyolardakinden daha yüksek olduğu sonucuna varılabilir. Yoğunluk değişiklikleri yaşayan donmuş embriyolardaki $Ca^{2+}$ dinamikleri, vitrifikasyon nedeniyle embriyo kalitesinde bir değişikliğe işaret eder.
Abstract
This study aims to determine the intracellular calcium profile and viability of embryos produced by the Intra-Cytoplasmic Sperm Injection (ICSI) method. In this study, there were 2 groups (T1: fresh embryos, T2: embryos post vitrification). The stages of the study included medium preparation, goat oocyte collection, in vitro maturation of Kacang goat oocytes, fertilization using the ICSI method, and examination of the calcium ($Ca^{2+}$) intensity profile of fresh embryos and embryos post vitrification per unit time (sec). Measuring the intensity of $Ca^{2+}$ using a Confocal Laser Scanning Microscope (CLSM) with time-lapse, taken at 3 points, namely point 1: edge, point 2: middle, and point 3: edge of the embryo sample. The fertilized embryos showed that the average calcium intensity of T1 was 334.62±8.60 and T2 was 408.2±13.67. The intensity of $Ca^{2+}$ in embryos post vitrification is higher than that of in fresh embryos. The oscillation of $Ca^{2+}$ in fresh embryos was in tune to the measurement point of 50 sec, while in embryos post vitrification the intensity from the $10^{th}$, $20^{th}$ early sec and the $50^{th}$ end interval were not consistent. It can be concluded that the intensity of $Ca^{2+}$ in embryos post vitrification is higher than that of in fresh embryos. The dynamics of $Ca^{2+}$ in frozen embryos experiencing changes in intensity indicate a change in embryo quality due to vitrification.