Kedi Ovaryumlarının Soğukta Saklama Solüsyonuna Melatonin Katılmasının, Kümülüs Ooforuslardaki Apoptoz ve Oositlerin Viyabilitesi ve İn Vitro Olgunlaşma Oranlarına Etkisi

Eff ects of Melatonin Addition to the Cold Storage Medium on Cumulus Oocyte Complex Apoptosis, Viability and In Vitro Maturation Rates of Cat Oocytes

Ahmet ESER, Kemal AK, Ramazan ARICI, Serhat PABUCCUOĞLU, Sema BİRLER, Selin YAĞCIOĞLU, Nur ERSOY, İdil ORUÇ, Mithat EVECEN, Kamber DEMİR, Bilge ÖZSAİT SELÇUK, Andaç KILIÇKAP, Evrim KÖMÜRCÜ BAYRAK, Gül BAKIRER ÖZTÜRK

Özet

İn vitro embriyo üretimi amacıyla, ovaryumların soğuk ortamlarda uzun süreli saklanması sonrası elde edilen oositlerin kullanılabilmesi, yaban hayatı ve nesli tükenmekte olan türlerin korunmasına yardımcı olabilir. Memeli gametleri, plazma zarlarındaki yüksek lipid içeriği nedeniyle, oksidatif strese karşı savunmasızdırlar. Melatonin, toksik oksijen türevlerini ortadan kaldırma ve reaktif türlerin oluşumunu azaltma özelliğinden dolayı güçlü bir antioksidan ve anti-apoptotik ajan olarak bilinmektedir. Çalışma, 4°C’de 24 saat süreyle muhafaza edilen ovaryum taşıma sıvısına (%0.9 NaCl) antioksidan olarak farklı dozlarda melatonin (500, 750 ve 1000 μM) eklenerek evcil kedi ovaryumlarının uzun süreli muhafazası için en uygun koşulları belirlemek amacıyla yapılmıştır. Melatoninin soğukta bekletilmiş ovaryumlardan kazanılan kedi oositleri üzerindeki etkisini belirlemek amacıyla; kümülüs ooforuslardaki anti ve proapoptotik gen seviyeleri, oositlerdeki in vitro olgunlaşma oranları, hücre membran stabilitesi ve hücre canlılığı gibi parametreler incelendi. Soğukta bekletilsin ya da bekletilmesin, tüm melatonin ilaveli gruplarda; kümülüs hücrelerindeki pro-apoptotik gen seviyelerinin (Bax) yükseldiği, buna karşın anti-apoptotik gen seviyelerinin ise (Bcl-2) düştüğü gözlendi (P

Abstract

Usage of oocytes obtained from ovaries aft er long-term cold storage for in vitro embryo production is a promising tool for the protection of wildlife and endangered animal species. Mammalian oocytes are susceptible to oxidative stress with regard to the high lipid content of plasma membranes. Melatonin is known as a powerful antioxidant and anti-apoptotic agent due to its ability to eliminate toxic oxygen derivatives and reduce the formation of reactive species. Th is study was performed to verify the optimal environmental conditions for long-term preservation of cat ovaries (Felis domesticus) by adding diff erent concentrations of melatonin (500, 750 and 1000 μM) to the storage medium (0.9% NaCl) as an antioxidant to be preserved at 4°C for 24 h. To determine the eff ect of melatonin on cat oocytes collected from stored ovaries, the anti and proapoptotic gene levels in cumulus oophorus, the in vitro maturation rates, the cell membrane and oocytes viability were evaluated. In all melatonin added groups regardless of whether they are stored in the cold; Pro-apoptotic gene levels (BAX) were determined to be upregulated however, antiapoptotic gene levels (BCL-2) were downregulated in cumulus cells (P