Dergiler / Hacettepe Fen ve Mühendislik Bilimleri Dergisi Seri C: Kimya / 1996 / Cilt: 17 - Sayı:
Serumda alkol tayini için alkol oksidaz-peroksidaz enzim çifti kullanılan yeni bir spektrofotometrik yöntem
- Sayfa
- 163–176
- DOI
- —
Özet
Etanol, alkollü içeceklerin günümüzde yaygın kullanımı nedeniyle, adli tıp ve klinik toksikoloji laboratuvarlannda tayinine sıkça ihtiyaç duyulan toksik maddelerden biridir. Beyin travmaları, üremi, diyabet asidozisi gibi hastalıkların sebep olduğu koma veya yüksek dozdaki uzun etkili insulinin neden olduğu hiperihsülinemi belirtileri alkol intoksikasyonunun belirtileriyle benzerlik göstermektedir. Bu nedenden dolayı yanlış bir teşhise neden olmamak için hastadan alınan fizyolojik sıvının etanol açısından biyokimyasal analizi büyük önem taşır. Bu çalışmada, alkol tayini için her laboratuvarda kullanılabilecek pratik, ekonomik ve duyarlı bir yöntemin geliştirilmesi amaçlanmış ve iki farklı enzimatik reaksiyon birlikte kullanılmıştır. Alkol oksidazın (EC 1.1.3.13) katalizlediği ilk reaksiyonda, etanol, asetaldehid ve hidrojen perokside dönüşür. İkinci reaksiyonu katalizleyen peroksidaz (EC 1.11.1.7) ise hidrojen peroksit ve bazı kromoforların varlığında kinonimin boyar maddesinin oluşumunu sağlar. Absorbanslar 520 nm'de ölçülür. Geliştirilen yöntemde 0,15-1,50 mM etanol konsantrasyon aralığında çizilen standart grafik ile çok duyarlı sonuçlar alındı. Alkol içermeyen bir serum örneğinde, etanol konsantrasyonu 0,77 mM olacak şekilde standart katma yapılarak yöntemin tekrarlanabilirliği (n = 8) incelendi. Ortalama değer (x) : 0,77 mM, standart sapma (S.S) : ± 0,029 ve varyans katsayısı (V.K) : % 3,8 olarak bulundu.
Abstract
Nowadays, ethanol has became as one of the important toxic materials which is very often in great need of being determined in forensic medicine and clinical toxicology as the alcoholic drinks are widely consumed. The symptoms of a coma due to some diseases: brain travma, uremia and diabetes acidosis or hyperinsulinizm caused by high dosage-long effective insulin show similarities with the symptoms of alcohol intoxication, therefore, the biomedical analyses of the physiological fluids taken from a patient is of great importance in terms of ethanol. In this study, it was aimed to develop a method which is economic, sensitive as well as practical enough for all laboratory. Therefore, two different enzymatic reaction were coupled. In the first reaction, catalyzed by alcohol oxidase (EC 1.1.3.13), ethanol was converted to acetaldehyde and hydrogen peoxide. Peroxidase (EC 1.11.1.7) catalyzing the second reaction forms quinonimine in the presence of hydrogen peroxide and cromofors. The observed linearity of the standard curve in the concentration range between 0,15-1,50 raM provides more sensitive results. The method was tested (n = 8) for the same serum sample containing 0,77 mM ethanol by standard addition which is initially free of alcohol and the average value (x), standard deviation (SD), variation coefficient (CV) were found 0,77 mM, ± 0,029 and 3,8%, respectively.