Purification of diamine oxidase from Arachis hypogea by affinity chromatography

Diamin oksidazın yer fıstığından affinite kromatografisi ile saflaştırılması

Özet

Diamin oksidaz, poroz cama histaminin bağlanmasıyla oluşturulan yeni bir affinite materyalinin kullanımıyla yer fıstığı fidelerinden 1865 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılan enzimin 66 kDa'luk moleküler kütleye sahip monomer olduğu belirlenerek histamin için Km ve Vmax değerleri sırasıyla, 1,1x$10^{-3}$ M ve 0.83 $mu$mol/mg.dak olarak hesaplanmıştır. Optimum pH ve sıcaklık ise 7.0 ve 37° C dir. Bununla birlikte, bakır bağlayıcı reaktifi dietilditiyokarbamatın, ayrıca karboksil ve imidazol gruplarına spesifik reaktiflerin enzim aktivitesi üzerine etkileri incelenmiştir.

Abstract

Diamine oxidase was purified 1865 fold from roots of peanut seedling using a new affinity material of histamine bound to porous glass. The purified enzyme was found as a monomer with a molecular weight of 66 kD a. The Km and Vmax for histamine were found to be 1.1x$10^{-3}$ M and 0.83 $mu$mol/mg.min. respectively. The optimum, temperature and pH were 37°C and 7.0. Furthermore, the effect of various inhibitors such as the copper binding reagent, diethyldithiocarbamate, carboxyl and imidazole group specific reagents on the enzyme activity was also studied.