Doğal Tetraploid Trifolium pratense L. Rejenerantlarında RAPD Markırları Kullanılarak Somaklonal Varyasyonun Belirlenmesi

Analysis of Somaclonal Variation in Natural Tetraploid Trifolium pratense L. Regenerants Using RAPD Markers

Özet

Trifolium pratense L., Avrupa, Kuzey Amerika, Anadolu'da yaygın olan yetişen tarımsal bir baklagildir. T. pratense L. Anadolu'da büyük çeşitlilik gösterdiği için Anadolu köken merkezi olarak kabul edilmiştir. Bu çalışma, in vitroda üretilen doğal tetraploid T. pratense L. rejeneratları ve donör bitkileri arasındaki somaklonal değişimi RAPD tekniklerini kullanarak analiz etmeyi amaçlamıştır. Bu çalışmada, 1 mg/1 NAA + 3 mg/1 BAP içeren PC - L2 besiyerine bitki büyüme düzenleyicisi içermeyen MS ortamında çimlendirilen aseptik bitkilerin apikal meristemleri ekilerek rejenerasyon yapılmıştır. Bu araştırmada, somaklonal varyasyonu saptamak için 8 farklı primer kullanılarak RAPD tekniği uygulanmıştır. Primerlerin tümü polimorfizm göstermiştir. En düşük polimorfizm yüzdesi, % 17.07 ($D_2-C_2$) ile 2 numaralı klon ve donör arasında görülmüş, en yüksek polimorfizm yüzdesi % 60.21 ($D_4-C_4$) ile 4 numaralı klon arasında görülmüştür. En yüksek varyasyon farkı donör D2 (toplam 123 bant) ve D6 (toplam 86 bant) arasında görülmüştür.

Abstract

Trifolium pratense L. is an agricultural legume which is grown mainly in Europe, North America, and Anatolia. Asthe plant shows great diversity in Anatolia, Anatolia was accepted as the center of the origin of T. pratense L. This study aimedto analyze somaclonal variation among natural tetraploid T. pratense L. regenerants propagated in vitro and their donor plantsby using RAPD techniques. In this study, for regeneration, the apical meristems of aseptic plants germinated on hormone-freeMS medium were used, then they were transfered on PC - L2 medium containing 1 mg/l NAA + 3 mg/l BAP. In this research,RAPD techniques including 8 different primers were used to detect somaclonal variation. As a result, all of the primers showedpolymorphism. The lowest polymorphism percentage was seen between number 2 clone and donor with 17.07% ($D_2-C_2$), thehighest polymorphism percentage was seen between number 4 clone and donor with 60.21% ($D_4-C_4$). The highest variationdifference was seen between donors D2 (a total of 123 bands) and D6 (total 86 bands).