Maternal plazmadaki hücre dışı serbest fetal DNA kullanılarak girişimsel olmayan fetal RhD genotiplemesinin tanısal doğruluğu

The diagnostic accuracy of non-invasive fetal RhD genotyping by using cell-free fetal DNA in maternal plasma

Özet

Giriş: Rh uyuşmazlığında fetusun RhD genotipinin girişimsel olmayan prenatal tanısı, RhD negatif fetus taşıyan gebelerin hemolitik hastalıklar için artmış anti-D immünoglobulin tedavisinin önlenmesinde önemli bir role sahiptir. Bu çalışmada maternal plazmadaki hücre dışı DNA kullanılarak fetal RhD genotiplemesinin saptanmasının tanısal doğruluğunu tespit etmek amaçlandı. Yöntem: Rh uyuşmazlığı bulunan farklı gebelik haftalarında (12-40 hafta), D negatif 12 gebeden periferik kan örnekleri toplandı. 2 ml maternal plazma kullanılarak konvansiyonel bir DNA izolasyon tekniği (Qiagen, Hilden, Almanya) ile hücre dışı DNA izole edildi. Real Time PCR tekniği kullanılarak fetal RhD geni ekzon 7, ekzon 10 ve GLO geninin genotiplemesi yapıldı. Postnatal serolojik değerlendirmeler yapılmış ve sonuçlar doğrulanmıştır. Bulgular: 6 olgu (% 50) D pozitif, 6 olgu (% 50) D negatif olarak belirlendi. Tüm sonuçlar ayrıca serolojik olarak doğumdan sonra doğrulandı. Sonuç: Sonuç olarak RhD uyuşmazlığı görülen gebelerde girişimsel olmayan bir yöntem olarak maternal plazmadan elde edilen hücre dışı fetal DNA kullanılarak yapılan RhD genotiplemesinin tanısal doğruluğa sahip olduğu gösterildi.

Abstract

Introduction: The non-invasive prenatal diagnosis of the fetus RhD genotype in RhD incompatibility has a crucial role in the prevention ofincreased anti-D immunoglobulin therapy for haemolytic diseases in pregnant women carrying RhD negative fetus. It was aimed to detect fetalRhD genotyping by using maternal circulating cell-free DNA in the current study.Methods: Maternal blood samples were collected in different trimester of pregnancies (12-40 weeks) in 12 D-negative mothers. Cell-free fetalDNA was extracted from 2 ml of maternal plasma by an conventional DNA isolation technique (Qiagen, Hilden, Germany) and real-time PCRwas performed for genotyping target RhD exons 7 and 10 and GLO genes. Postnatal serological evaluations were performed and the results wereconfirmed.Results: 6 cases (50 %) were determined D positive and 6 cases (50 %) were determined D negative. All results were also confirmed after birthserologically.Conclusions: In conclusion, the current results showed us the non-invasive target RhD genotyping from cell free fetal DNA from maternalplasma samples have a diagnostic accuracy in RhD incompatibility pregnancies.