PFOS ile tedavi edilen Sertoli hücre kültüründe ezrin ve fascin 1'in araştırılması: İn vitro bir çalışma

Evaluation of ezrin and fascin 1 in the PFOS treated Sertoli cell culture: An in vitro study

Özet

Amaç: Bu çalışmada, Ezrin ve Fascin 1’in in vivo olarak baskılanması sonucundaki bulgularla birlikte, Kan testis bariyeri (KTB) yapısının bozulması ve primer Sertoli hücre kültüründe, Perflorooktansülfonat (PFOS) muamelesinden sonra F-aktin demetlenmesinin gösterilmesi amaçlanmaktadır. Çalışma Tasarımı: Primer Sertoli hücre izolasyonu, kontrol ve PFOS ile muamele edilen (20μM) gruplarla yapıldı. Sertoli hücre konsantrasyonu her iki deney için 0.5 x 106 hücre/ml olacak şekilde hazırlandı. Metod: Hem Fascin 1'in Sertoli hücrelerinde Ezrin ile birlikte lokalizasyonunu değerlendirmek üzere çift etiketli immünofloresan analizi yapıldı, hem de seminifer tübül lizatlarından aktin ve Ezrin proteinlerinin Fascin 1 proteini ile spesifik protein-protein etkileşimini tanımlamak için Co-IP deneyi uygulandı. Bulgular: İlk olarak, ektoplazma özelleşmesi bileşenleri olan Ezrin ve Fascin 1 in Sertoli hücrelerinde ko-lokalize olduğu ve birbirleri ile etkileşime girdiği gösterilmiştir. İkinci olarak ise PFOS ile muamele edilen Sertoli hücrelerinde Ezrin ve Fascin 1 dislokasyonu gösterilmiştir. 20μM PFOS uygulandığında aktin tabanlı hücre iskeleti KTB’deki hüce-hücre bağlantı bölgelerindeki aktin düzenleyici proteinlerin yayılmasını ve/veya lokalizasyonunu destekleyememiştir. Tartışma: Sonuç olarak bu bulgular, PFOS aracılı Sertoli hücre bozulmasında, Ezrin ve Fascin 1'in KTB bütünlüğünü korumak için F-aktin organizasyonunu düzenleyerek birlikte çalışabileceğini desteklemektedir.

Abstract

Aim: Depending on the findings resulting from the knock-downing of ezrin and of fascin 1 in vivo, we aim to show the defects or disruption of the blood-testis barrier (BTB)structure and F-actin bundling after Perfluorooctanesulfonate (PFOS) treatment inprimary Sertoli cell culture.Study Design: Primary Sertoli cell isolation was occurred with control andPFOS-treated (20M) groups. Sertoli cells were prepared for both experiments as0.5 x 106 cell/ml.Methods: Dual-labeled immunofluorescence analysis to assess co-localization offascin 1 with ezrin both in Sertoli cells was performed, and Co-IP, by using lysates ofseminiferous tubules, was performed using actin and ezrin proteins to identify specificprotein-protein interaction with fascin 1.Results: Firstly, we showed that ezrin and fascin 1, which were components ofthe ectoplasmic specialization were co-localized in the Sertoli cells and also theywere interacted each other. Secondly, we indicated that they were dislocated in thePFOS-treated Sertoli cells in vitro. Because of PFOS (20M), the actin-based cytoskeleton was no longer capable of supporting the distribution and/or localization ofactin-regulatory proteins at the cell-cell interface necessary to maintain localizationof actin-regulatory at the BTB.Conclusion: In summary, these findings suggest that ezrin and fascin 1 can worktogether to preserve BTB integrity by regulating F-actin organization in the PFOS-mediated Sertoli cell disruption.