Dergiler / Lalahan Hayvancılık Araştırma Enstitüsü Dergisi / 2007 / Cilt: 47 - Sayı: 2
7 günlük in-vitro sığır embriyolarının vitrifikasyonla dondurulması
- Sayfa
- 1–5
- DOI
- —
Özet
Bu çalısmanın amacı, in vitro olarak üretilen sıgır embriyolarının, vitrifikasyon metodu ile dondurulma basarısının incelenmesidir. Mezbahada kesilen ineklerin ovaryumlarından elde edilen oositlerden üretilmis 100 adet iyi kalite in-vitro sıgır embriyosu, kültürlerinin yedinci gününde vitrifikasyon metodu ile dondurulmustur. Vitrifikasyon solüsyonları olarak, VS1 (0.1 M Sakkaroz + 0.1 M Ksiloz + %1 Polietilen Glikol + %10 Gliserol), VS2 (0.2 M Sakkaroz + 0.2 M Ksiloz + %2 Polietilen Glikol + %10 Gliserol + %10 Etilen Glikol) ve VS3 (0.3 M Sakkaroz + 0.3 M Ksiloz + %3 Polietilen Glikol + %20 Gliserol + %20 Etilen Glikol) kullanılmıstır. Vitrifikasyon solüsyonları ile muamele edilen embriyolar payetler içine yerlestirildikten sonra sıvı azot içerisinde dondurulmustur. Çözündürmede, sıvı azot içerisinden çıkarılan payetler 5-6 saniye havada tutulmus, 200C’de suda tamamen çözündürülmüstür. Embriyolar kriyoprotektanların uzaklastırılması (devitrifikasyon) islemi için sırasıyla 0.5 M ve 0.25 M Sakkaroz solüsyonları içerisine alınmıstır. Sonra embriyolar morfolojik degerlendirme için %20 buzagı serumlu Dulbecco’nun Fosfat Tampon Solüsyonu (D-PBS) içerisine alınmıstır. Kültür medyumu olarak TCM- 199 + 0,1mM -Merkaptoetanol + %20 Fötal Buzagı Serumu (FCS) kullanılmıstır. in vitro canlılık kontrolü amacıyla embriyolar, %5 CO2, %99 bagıl nem ve 38,50C‘deki inkubatörde 24-48 saat inkubasyona tabi tutulmustur. Çözündürme sonrası PBS’e alınan 100 adet embriyonun, 85’inin intakt oldugu görülmüstür. Blastosistlerin re-ekspansiyon ve zonadan çıkma oranı %35 bulunmustur. Buna göre in vitro üretilerek vitrifiye edilen sıgır embriyolarında %35 canlılık tespit edilmistir. n vitro üretilen embriyolar vitrifikasyon metodu kullanılarak kolaylıkla dondurulmus ve tatminkar düzeyde canlılık saglanmıstır.
Abstract
The aim of the study was to investigate the effect of vitrification on in vitro produced bovine embryos. For this purpose, oocytes were provided from ovaries of slaughtered cows and 7 days after start of embryo culture 100 good quality in vitro produced bovine embryos were frozen by vitrification method. Vitrification solutions were composed as VS1 (0.1 M Sucrose + 0.1 M Xylose + 1% Poly Ethylene Glycol + 10% Glycerol), VS2 (0.2 M Sucrose + 0.2 M Xylose + 2% Poly Ethylene Glycol +10 % Glycerol + 10% Ethylene Glycol) and VS3 (0.3 M Sucrose + 0.3 M Xylose + 3% Poly Ethylene Glycol + 20% Glycerol + 20% Ethylene Glycol). The processed embryos with vitrification solutions were frozen in liquid nitrogen after placed into straws. The straws were thawed by holding in air for 5-6 sec and in 200C water. Embryos were transferred 0.5 M and 0.25 M sucrose solutions for devitrification procedure respectively. Then, the embryos were transferred into D-PBS (with 20% calf serum) for morfological evaluation. TCM-199 + 0.1mM -Mercaptoethanol + 20% Foetal Calf Serum (FCS) composition was used as culture media. For in vitro survival control, embryos were incubated in the conditions with regard to 5% CO2, at 38.50C and 99% humidity for 24-48 hours. 85 intacted embryos were obtained from 100 embryos after thawing in Phospate Buffer Solution. The re-expansion and hatching rate of blastocysts were 35%. So, in vitro produced and vitrified bovine embryos survived with rate of 35%. As a result, in vitro produced embryos were frozen easily by vitrification method and provided satisfactory level for survival.