Trichophyton sp. Suşundan Keratinaz Üretimi, Saflaştırılması ve Kısmi Karakterizasyonu

Özet

Keratinaz aktivitesi gösteren Trichophyton sp. Tr-9 suşu keratin tozufeather meal içeren minimal besiyerinde büyütürek enzim üretimi gerçekleştirilmiştir. Süpernatanttan Amonyum sülfat çöktürmesonrası, Sephadeks G-100 ve DEAE Sepharose kolon kromatografiuygulamaları ile enzim saflaştırılması yapılmıştır. Maksimumkeratinolitik aktivite pH 7.5 ve 37°C’de gözlenmiştir. Enzim pH 5.5-8.0 ve 20°C-40°C sıcaklık aralıklarında stabilite gösterirken,enziminin moleküler ağırlığı SDS page ve zimogram analizlerindeyaklaşık 34 kDa olarak hesaplandı. CaCI2 (5mM) keratinazaktivitesini (%148) stimüle edici etki gösterdi. Diğer taraftan EDTA(5mM) ve SDS (%1) sırasıyla %49, % 49 etki göstererek kısmen inhibeetti, PMSF (1mM ve 5mM) ile tam inaktivasyon elde edildi. Sonuçolarak, enzimin fiziko-kimyasal özellikleri birçok endüstriyel vebiyoteknolojik uygulamalarda kullanışlı olabileceğini göstermiştir.

Abstract

Keratinase enzyme production was accomplished from Trichophyton sp. Tr-9 in minmal medium containing feather meal. Enzyme was purified with Ammonium sulfate, Sephadeks G-100 and DEAE Sepharose column. Maxiumum keratinolitik activity was obtained at pH 7.5 and 37°C. Enzyme was higly stabil between pH 5.5-7.5 and 20- 40oC. With the SDS-Page analysis of the enzyme, molecular weight of the enzyme was calculated as 34 kDa. CaCI2 (5mM) had a stimultory effect (148%) on enzyme. On the other hand, EDTA (5mM) and SDS (%1) inhibited enzyme acitivity up to 49% and 49%, respectively. PMSF (1- 5mM) has strongly inhibited enzyme. As a result, physicochemical properties of the enzymeshowed that Trichophyton sp. Tr-9 could be useful in various industrial and biotechnological applications.