Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2009 / Cilt: 43 - Sayı: 1
Solunum yolu enfeksiyonu olan askerlerin nazofarengeal örneklerinde adenovirus varlığının ve alt gruplarının araştırılması
- Sayfa
- 91–101
- DOI
- —
Özet
Adenoviruslar (AdV), konjunktivit, ishal, hepatit, sistit, miyokardit ve ensefalit gibi pek çok klinik durumla ilişkili olmasına rağmen, özellikle çocuklarda ve askeri personelde solunum yolu enfeksiyonlarıyla ilişkili önemli viral patojenlerdir. Bu çalışmanın amacı, herhangi bir salgın durumu olmaksızın seçilmiş bir bölgedeki askeri personelde akut solunum yolu hastalığıyla ilişkili AdV'lerin saptanması ve alt gruplarının belirlenmesidir. Çalışmaya, Şubat 2006-Mart 2006 tarihlerinde ateş (> 38.0°C) ve solunum yolu semptomları olan 20-29 yaş arasındaki tamamı erkek 180 askerden alınan boğaz sürüntüsü örnekleri dahil edilmiştir. Tüm örneklerde AdV varlığı HEp-2 hücre kültürlerine ekim ve özgül primerler ve probun kullanıldığı gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemiyle araştırılmıştır. AdV'ye özgü sitopatik etkinin görüldüğü pozitif hücre kültürlerindeki üreme, gerçek zamanlı PCR ile de doğrulanmıştır. AdV B, C ve E alt gruplarının ayırımı ise, bu alt gruplara özgül primerlerin kullanıldığı konvansiyonel PCR yöntemiyle yapılmıştır. Alt gruba ait PCR ürünleri, özgül olup olmadıklarının kontrol edilmesi amacıyla Mspl restriksiyon enzimi ile kesilmiştir. Çalışmamızda 180 örneğin 8 (%4.4)'inde hücre kültürü ile, 9 (%5)'uda ise gerçek zamanlı PCR ile AdV pozitifliği belirlenmiş, hücre kültüründe pozitif bulunan örneklerin hepsi PCR ile de pozitif sonuç vermiştir. PCR ile pozitif saptanan 9 örnekten 8 (%88.8)'inin E alt grubuna ait olduğu bulunmuş (bu grupta sadece AdV tip 4 yer almaktadır), bu veri restriksiyon enzim kesimi ile doğrulanmış, bir suş ise mevcut primerlerle tiplendirilememiştir. Sonuç olarak, boğaz sürüntüsü örneklerinde AdV'lerin saptanmasında ve alt grup tayininde gerçek zamanlı TaqMan PCR ve restriksiyon enzim analizinin duyarlı ve özgül yöntemler olduğu belirlenmiş ve çalışma grubumuzda saptanan düşük oran nedeniyle AdV enfeksiyonlarının askerler arasında aşı uygulamasını gerektirecek bir sağlık problemi olmadığı düşüncesine varılmıştır.
Abstract
Adenoviruses (AdV) are important pathogens primarily associated to respiratory infections of children and military staff even though it is also associated to many clinical manifestations, such as cystitis, conjunctivitis, diarrhea, hepatitis, myocarditis, and encephalitis. The goals of this study were to detect and type acute respiratory disease associated AdV isolates among military trainees in a selected region without an evidence of an outbreak. Throat swab samples were obtained during February 2006-March 2006 period, from 180 military male trainees aged 20-29, who were presented with respiratory tract symptoms and an oral temperature of > or = 38.0 degrees C. All specimens were tested by HEp-2 cell culture and real-time TaqMan PCR with AdV specific primers and probes. Positive cell culture results, presented as AdV-specific cytopathic effects, were confirmed by real-time polymerase chain reaction (PCR). AdV subgroup differentiation were performed using conventional PCR assays with the primer set specific for subgroup B, C or E. Subgroup specific PCR products were restricted with Mspl enzyme in order to check whether they were specific or not. AdV positivity was detected in 8 (4.4%) samples by cell culture and in 9 (5.0%) by the real-time PCR. All culture positive samples were also positive by real-time PCR. Eight of the nine real-time PCR-positive specimens were found to be in the subgroup E (this group contains only AdV type 4) and the results were confirmed with restriction enzyme analysis. One isolate could not be typed with the available primers. These data indicated that both real-time TaqMan PCR and restriction enzyme analysis provide sensitive and specific tools for AdV detection and subgroup differentiation for throat swab specimens. It can be concluded that since the prevalence of AdV infections was low in the study group, AdV infections were not considered as a vaccine requiring health problem in Turkish armed forces, however, larger scale studies were needed to reach a more precise conclusion.