Dergiler / Mikrobiyoloji Bülteni / 2014 / Cilt: 48 - Sayı: 1
İnvazif enfeksiyonlara neden olan GSBL pozitif enterobacteriaceae izolatlarında karbapenem direnci
- Sayfa
- 59–69
- DOI
- —
Özet
Bu çalışmada 2005-2009 yılları arasında Hacettepe Üniversitesi Hastanesinde invazif enfeksiyonlardan izole edilen Enterobacteriaceae türlerinde karbapenem direnç varlığının fenotipik ve genotipik olarak gösterilmesi amaçlanmıştır. Çalışmaya, BD Phoenix (Sparks, ABD) sistemiyle geniş spektrumlu beta-laktamaz (GSBL) pozitif olarak tespit edilen 153’ü Escherichia coli, 47’si Klebsiella pneumoniae, 10’u Klebsiella oxytoca olmak üzere toplam 210 kan izolatı dahil edilmiştir. İzolatların imipenem, meropenem ve ertapeneme karşı duyarlılıkları, CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute) önerilerine uygun şekilde mikrodilüsyon yöntemiyle, doripenem duyarlılığı ise E-test (bioMerieux, Hazelwood, ABD) yöntemiyle araştırılmıştır. Çalışmada karbapeneme dirençli olarak tespit edilen izolatlarda fenotipik doğrulama testleri uygulanmış ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemiyle blaAmpC’ blaCTX-M, blaKPC, blaNDM, blaOXA, blaIMP ve blaVIM a p a antibiyotik direnç genlerinin varlığı araştırılmıştır. Çalışmamızda, GSBL üreten 210 Enterobacteriaceae kan izolatının 23 (%11)’ünde karbapenem direnci saptanmış; imipenem, meropenem ve ertapenem direnci sırasıyla %5.7 (n= 12), %1.9 (n= 4) ve %2.4 (n= 5) olarak belirlenmiştir. İzolatlara karşı en etkin karbapenem grubu antibiyotiğin doripenem (direnç %1) olduğu gözlenmiştir. Yirmi üç izolatın yedisi sefotaksim/klavulanik asit (CTX/CLA) ve seftazidim/klavulanik asit (CAZ/CLA) kombine disk difüzyon yöntemiyle GSBL negatif bulunurken, CTX/CLA diskine boronik asit (BA) ilavesiyle yapılan modifiye kombine disk difüzyon yönteminde altı izolatın GSBL pozitif olduğu tespit edilmiştir. Modifiye Hodge testi (MHT) ve/veya ertapenem-BA kombine disk difüzyon testleriyle pozitif olarak saptanan üç izolatın birinde blaOXA-48, diğerinde blaAmpC geni saptanmıştır. Fenotipik olarak pAmpC varlığı tespit edilen üç a K.pneumoniae izolatının birinde blaAmpC geni gösterilmiştir. Bütün antibiyotikler için MİK değeri 256 μg/ e a ml olan ve meropenem-BA, MHT, imipenem-EDTA, seftazidim-CAZ/CLA, sefoksitin-BA pozitif olan bir K.pneumoniae izolatında blaOXA-48 gen varlığı saptanmıştır. Beş izolatta blaOXA-1 ve bir izolatta blaOXA-10 e OX 8 gen varlığı gösterilmiştir. İki izolat blaCTX-M pozitif olarak bulunmuş; izolatların hiçbirinde blaIMP, blaVIM ve a P blaNDM-1 genleri tespit edilmemiştir. Sonuç olarak, dört yıllık sürede izole edilen invazif Enterobacteriaceae türlerinin karbapenemlere olan direnç değerleri düşük düzeyde bulunmuştur. İzolatlardaki direnç, genel- likle blaOXA tipi karbapenemazlara bağlıdır ve bu izolatlarda blaKPC ve blaNDM varlığı saptanmamıştır.
Abstract
The aim of this study was to investigate the presence of carbapenem resistance in Enterobacteriaeceae isolates recovered from invasive infections, in Hacettepe University Hospital, Ankara, Turkey, between 2005-2009, by phenotypic and genotypic methods. A total of 210 non-duplicated Escherichia coli (n= 153), Klebsiella pneumoniae (n= 47) and Klebsiella oxytoca (n= 10) isolates which were all determined e a to be extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) positive with the BD Phoenix automated identification and antibiotic susceptibility system (Sparks, USA), were included in the study. The isolates were recov- ered from patients with bloodstream infections. Susceptibility of the isolates to imipenem, meropenem and ertapenem was detected with microdilution method according to the standards of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) minimal inhibitory concentration (MIC) breakpoints. Doripenem susceptibility was detected by the E-test (bioMerieux, Hazelwood, USA). All isolates which were found to be non-susceptible to any of the carbapenem antibiotics tested, were characterized by the phenotypic confirmatory tests and the presence of the resistance genes; blaAmpC, blaCTX-M, blaKPC, blaNDM, blaOXA, a blaIMP ve blaVIM were screened by polymerase chain reaction (PCR). Among the 210 ESBL-producing a Enterobacteriaceae blood isolates, 23 (11%) were identified as non-susceptible to any of the carbap- e enems tested. Resistance rates for imipenem, meropenem and ertapenem were 5.7% (n= 12), 1.9% (n= 4) and 2.4% (n= 5), respectively. Doripenem was more active than the other carbapenems, with a resistance rate of 1.0%. Seven of 23 isolates were ESBL negative with cefotaxime/clavulanic acid (CTX/ CLA) and ceftazidime/clavulanic acid (CAZ/CLA) combined disk diffusion test, however, six of them were ESBL positive with the addition of boronic acid (BA) to CTX/CLA. Among the three isolates positive for Modifiye Hodge test (MHT) and/or ertapenem-BA tests, blaOXA-48 was detected in one and blaAmpC in the other. Phenotypic pAmpC activity was present in three K.pneumoniae isolates of which one was positive for blaAmpC gene. One K.pneumoniae isolate resistant to all carbapenems with MICs > 256 μg/ a e ml and positive for phenotypic meropenem-BA, MHT, imipenem-EDTA, ceftazidime-CAZ/CLA, cefoxitin- BA production, was found to inhabit blaOXA-48 gene. Five isolates were positive for blaOXA-1 and one for blaOXA-10. Two isolates were positive for blaCTX-M, however blaIMP, blaVIM and blaNDM-1 genes were not detected among the isolates. In conclusion, carbapenem non-susceptibility which was low among the Enterobacteriaceae strains isolated in our center, was mostly attributed to the presence of blaOXA typecarbapenemases and no accumulation of blaKPC and blaNDM were detected.