Molecular Typing of Clostridium perfringens Toxins (α, β, ε, ι) and Type ‘A’ Multidrug Resistance Profile in Diarrheic Goats in Pakistan

Pakistan’da İshalli Keçilerde Clostridium perfringens Toksinlerinin (α, β, ε, ι) Moleküler Tiplendirilmesi ve Tip ‘A’ Çoklu İlaç Direnç Profili

Amjad Islam AQIB,Abdullah Saghir AHMAD,Shahid Hussain FAROOQI,Aftab Ahmad ANJUM,Muhammad IJAZ,Aneela Zameer DURRANI,Kashif HUSSAIN

Özet

Clostridium perfringens (C. perfringens) hayvanlarda enterotoksemi olarak adlandırılan hastalığına neden olur. Bu bakteri hayvanların gastrointestinal sisteminin normal florasında yer alır ve uygun şartlar oluştuğunda fırsat bularak koloni sayısını artırarak ve aynı zamanda toksinlerini salarak zararlı hale gelir. Bu çalışma Pakistan'da ishalli keçilerde Clostridium perfringens'in (?, ?, ?, ?) moleküler tiplendirilmesini ve tip 'A' çoklu ilaç direnç profilinin belirlenmesini amaçlamaktadır. İshalli dışkı örnekleri (n=192) keçilerden toplandı ve örneklerin %80.73'ü (155/192) kültürde üreme ve PCR analizleri ile C. perfringens pozitif olarak belirlendi. Pozitif örneklerin %33.55'inde (52/155) artmış C. perfringens miktarları (>107 CFU/g) tespit edildi. Pozitif örneklerin %66.45'inde (103/155) bakteri miktarları normal aralıklarda (104-107 CFU/g) gözlemlendi. Moleküler tespit amacıyla PCR kullanılarak C. perfringens'in cpa (?), cpb (?), etx (?) ve iap (?) toksin genleri hedef alındı. Pozitif örnekler arasında izolatların %78.06'sı tip 'A', %5.16'sı tip 'B', %3.23'ü tip 'C' ve %13.55'i tip 'D' C. perfringens olarak belirlendi. İzolatların hiçbiri iap toksin geni (tip 'E') için pozitif değildi. C. perfringens tip 'A'ya in-vitro antibiyotik sensitivite testi uygulandı. Bakterilerin penisilin, siprofloksasin ve seftriaksona karşı duyarlı oldukları, basitrasin, amoksisilin ve ampilisine karşı ise en az duyarlı oldukları tespi edildi. Bu çalışma, Pakistan'da C. perfringens tip 'A'nın keçiler arasında oldukça yaygın olduğunu ve klinik enterotoksemi vakalarında penisilin, siprofloksasin ve seftriaksonun etkili bir şekilde kullanılabileceğini göstermiştir

Abstract

Clostridium perfringens (C. perfringens) causes disease, generally, named as enterotoxemia in the animals. This bacterium is a normal inhabitant in gastro-intestinal tract (GIT) of animals and become harmful by increasing its colony counts as well as toxin liberation whenever gets an opportunity of favorable conditions. This study focused molecular typing of C. perfringens (α, β, ε, ι toxins) and type ‘A’ multidrug resistance profile in diarrheic goats in Pakistan. Diarrheic fecal samples (n=192) were collected from goats and 80.73% (155/192) of the samples were found positive for C. perfringens on the basis of culture growth and PCR. Elevated C. perfringens counts (>107 CFU/g) were recorded in 33.55% (52/155) of positive samples, while, 66.45% (103/155) of the positive sample appeared in normal range of bacterial counts (104-107 CFU/g). Molecular detection was carried out by targeting specific toxin genes i.e. cpa (α), cpb (β), etx (ε) and iap (ι) of C. perfringens using PCR. Among the positive samples, 78.06% of the isolates were found as type ‘A’, 5.16% isolates were type ‘B’, 3.23% isolates were type ‘C’ while, 13.55% of the positive samples were type ‘D’ C. perfringens. None of the isolates was found positive for iap toxin gene (type ‘E’). C. perfringens type ‘A’ was subjected to in-vitro antibiotic sensitivity test. Penicillin, ciprofloxacin and ceftriaxone were found sensitive while bacitracin, amoxicillin and ampicillin were found least sensitive antibiotics. This study concludes that C. perfringens type ‘A’ is highly prevalent among goats in Pakistan and clinical cases of enterotoxemia can be effectively dealt with penicillin, ciprofloxacin and ceftriaxone antibiotics