Anti-paraziter Etkili İlaçların Blastocystis İzolatlarının Canlılıkları Üzerine Etkilerinin MTT Testi ile Belirlenmesi

Determination of the Effects of Anti-parasitic Drugs on the Viability of Blastocystis Strains Via MTT Assay

Funda DOĞRUMAN AL,Gülcan ADIYAMAN,Tuğçe Nil YANTIRA,Süheyla HASGÜR,EMİN ÜMİT BAĞRIAÇIK

Özet

Blastocystis spp., tüm dünyada sık görülen bir protozoon parazittir. Blastosistozun tedavisinde metronidazol yaygın olarak kullanılan ilaçlar arasındadır. Son zamanlarda bazı hastalarda metronidazol tedavisinde başarısızlık olduğu tespit edildiği bildirilmiştir. Bu durum metronidazole karşı direncin ortaya çıktığını düşündürmektedir. Bu çalışmada ornidazol, siprofloksasin, trimetoprim-sülfametoksazol (TMP-SMX) ve metronidazolün Blastocystis türlerinin canlılıkları üzerine etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. İlaçlara karşı parazit canlılığının belirlenmesi amacıyla MTT yöntemi (Cell Proliferation Kit MTT, Roche, USA) kullanılmıştır. Üç olgunun dışkılarında mikroskobik olarak nativ-lugol inceleme ile tespit edilen Blastocystis spp. (A,B,C) izolatları kültür ortamına inoküle edilmiştir. Daha sonra parazitler antibiyotik ve antifungal içeren yeni bir kültür ortamına aktarılmıştır. Kültür ortamı bakteriyel kontaminasyonun kontrolü için mikrobiyolojik besiyerlerine ekilerek inkübe edilmiştir. İlaçların seri dilüsyonları 96 kuyulu mikroplaklarda hazırlanmış ve parazit hücreleri her bir kuyucuğa eklenmiştir. Her üç suşun kullanılan ilaçlara karşı farklı direnç profili gösterdiği belirlenmiştir. A suşunun canlılığı üzerine siprofloksasin en etkili ilaç olduğu belirlenirken, C suşuna TMP-SMX ve ornidazolün etkisinin yüksek olduğu tespit edilmiştir. B suşunun canlılığının ise kullanılan tüm ilaç konsantrasyonlarından etkilenmediği gözlenmiştir. Bu çalışmada blastosistozda etkin tedavi uygulayabilmek için geliştirilecek standart bir anti-paraziter ilaç duyarlılık testine gereksinim duyulduğu sonucuna varılmıştır

Abstract

Blastocystis spp., a protozoan parasite are common around the world. Metronidazole has been commonly used in treatment of Blastocystosis. Recently it has been reported that metronidazole treatment failed in some patients. Therefore, this finding would be related to resistance to metronidazole. This study aims to investigate viability of Blastocystis spp. following treatment with ornidazole, ciprofloxacin, and trimetroprim-sulfamethoxazole (TMP-SMX) and metronidazole. Viability of the parasite was measured using MTT assay (Cell Proliferation Kit MTT, Roche, USA). Stool samples from three cases where Blastocystis spp. (A,B,C) had been detected in nativelugol examinations were incubated in culture medium. Then the parasites were transferred into a fresh medium containing antibiotics and antifungals. Microbiological culture mediums were used checking for bacterial contamination. On a 96- well microplate, serial dilutions of drugs were prepared and parasites were added into wells. The resistance behaviour of every strains was differentiated. While ciprofloxacin was the most powerful anti-parasitic drug on the viability of strain A, TMP-SMX and ornidazole were highly effective on strain C. Viability of strain B was not to affected by concentration of the drugs. We concluded that standardized sensitivity test for anti-parasitic drugs was needed for effective treatment of Blastocystosis