Dergiler / Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi / 2012 / Cilt: 18 - Sayı: 1
Determination of insulin in rabbit plasma using high-performance liquid chromatography
- Sayfa
- 31–36
- DOI
- —
Özet
Bu çalışmanın amacı tavşan plazmasında insülinin tespit edilmesi için yüksek basınçlı sıvı kromatografisine (YBSK) dayalı bir yöntem geliştirmek ve geçerlilik testi yapmaktır. İnsülinin ayırımı dalga boyu λ=206 nm olan diyot array dedektör (DAD) kullanılarak Ace C18 kolon (5 μm, 250×4.6 mm i.d.) ile yapılmıştır. Hareketli faz 0.2 M sülfat tamponu (pH 2.4)-asetonitril (75:25, h/h) den oluşmuştur. Analiz 1.2 mL/dk akış hızı ile 15 dakikadan daha az sürede yapılmıştır. 0.15 ve 10 μg/mL arasında çok iyi doğrusallık bulunmuştur. Plazmada insülin için gün içi ve günler arası kesinlik değerleri %10.2’den küçüktü ve doğruluk (bağıl hata) %12.4’den daha iyiydi. Bütün örnekler için geri kazanım >%87.3 idi. İnsülinin belirlenebilen (LOD) ve ölçülebilen (LOQ) en düşük değeri sırasıyla 0.10 and 0.15 μg/mL’dir. Tanımlanan YBSK yöntemi tavşanlarda insülinin farmakokinetiğini incelemek için yeterli duyarlılığa ve özgüllüğe sahiptir ve klinik farmakokinetik çalışmalara da uyarlanabilir.
Abstract
The aim of the present study was to develop and validate a procedure based on high-performance liquid chromatography (HPLC) for determination of insulin in rabbit plasma. Separation of insulin was achieved on an Ace C18 column (5 μm, 250×4.6 mm i.d.) using diode array detection (DAD) with λ=206 nm. The mobile phase consisted of 0.2 M sulfate buffer (pH 2.4)-acetonitrile (75:25, v/v). The analysis was performed in less than 15 min with a flow rate of 1.2 mL/min. Excellent linearity was found between 0.15 and 10 μg/mL. Intra- and inter-day precision values for insulin in plasma were less than 10.2, and accuracy (relative error) was better than 12.4%. The recoveries for all samples were >86.7%. The limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) of insulin were 0.10 and 0.15 μg/mL, respectively. The described HPLC method has adequate sensitivity and specificity to study pharmacokinetics of insulin in rabbits, and could be adapted also to clinical pharmacokinetic study.