The Evaluation of Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Using Antigens Prepared from Brucella abortus RB51 and Brucella canis M- Variant Strains for Serologic Diagnosis of Brucella ovis Infection

Brucella abortus RB51 ve Brucella canis M- Varyant Suşlarından Hazırlanan Antijenlerin Kullanıldığı Enzim Bağlı İmmünosorbent Testinin Koyunlarda Brucella ovis İnfeksiyonunun Serolojik Tanısında Kullanılabilirliğinin Araştırılması

Özet

Bu çalışmada, biri ticari Brucella ovis ELISA kiti olmak üzere 3 ELISA ve smooth ve rough suşlardan hazırlanan Rose Bengal pleyt aglütinasyon testleri (S-RBPT ve R-RBPT) ile karşılaştırmalı olarak test edilerek, B. ovis infeksiyonunun serolojik tanısında ELISA'nın kullanılabilirliğinin araştırılması amaçlandı. Çalışmada, Güneydoğu Anadolu Bölgesinin çeşitli illerinden (Şanlıurfa, Mardin, Gaziantep, Diyarbakır) toplanan toplam 183 koyun serumu test edildi. ELISA antijeni olarak B. abortus RB51 ve B. canis M- varyant suşlarının sıcak tuzlu suda ekstraksiyonları (STE-RB51, STE-M-) hazırlandı. Konjugat olarak horseradish peroksidaz ile işaretli rekombinant A/G proteini (A/G-HRPO) kullanıldı. Seropozitiflik yüzdesi RB51 antijenini kullanan ELISA için %11 iken, diğer iki ELISA için %3.3 olarak bulundu. S-RBPT ile serumların %7.6'sı ve R-RBPT ile %2.7'si pozitif bulundu. Sadece 2 serum R-RBPT ve 3 ELISA ile pozitif reaksiyon verdi. Ticari B. ovis ELISA kiti ile STE-M-ELISA ile aynı sayıda ve aynı serumlardan pozitif reaksiyon alınması STE-M- antijeninin B. ovis infeksiyonunun serolojik tanısında ELISA için iyi bir aday antijen olabileceğinin kanısına varıldı. Kullanılan serolojik testlerden sadece STE-RB51-ELISA ile pozitiflik yüzdesinin %7.6 olması testin özgüllüğünün diğer testlere göre daha düşük olabileceği kanısı uyandırdı. Ayrıca R-RBPT' nin bir tarama testi olmasına rağmen en düşük seropozitiflik oranı göstermesinin M-varyant suşunun daha az mukoid bir yapı içermesi nedeni ile çapraz reaksiyonları azaltması sonucu olabileceği düşünüldü.

Abstract

The aim of this work was to investigate the possible usage of hot saline extract antigens (HSE) of Brucella abortus RB51(HSE-RB51) and B. canis M- variant strains (HSE-M-) in ELISA by comparing the results with those of obtained from commercial I-ELISA kit for the serological diagnosis of B. ovis infection. In this study, a total of 183 serum samples collected from different cities (Şanlıurfa, Mardin, Gaziantep, Diyarbakır) in Southeastern Anatolia Region of Turkey were tested by using three ELISAs, one of which is from a commercial source, Rose Bengal plate agglutination tests prepared by rough (R-RBPT) and smooth strains (S-RBPT). Recombinant protein A/G conjugated with horseradish peroxidase (A/G-HRPO) was used as conjugate in the in house ELISAs. Seropositivity rate was 11% for HSE-RB51-ELISA and 3.3% for both HSE-M- and commercial ELISA. The percentage of positive results was 7.6% for S-RBPT and 2.7% for R-RBPT. Only 2 serum samples were positive for all the tests except S-RBPT. Because similar results were obtained from the same serum samples by both commercial ELISA and HSE-M-ELISA, these results may suggest that HSE-M- antigen could be used in ELISA for serologic diagnosis of B. ovis infection in sheep. Since 7.6% of the serum samples were found as positive by only HSE-RB51-ELISA, it was assumed that this test could be less specific or more sensitive than other tests used in the study. Although R-RBPT is a screening test, it showed the lowest seropositivity in the study. This could be explained by less mucoid nature of its antigen than other test systems using natural rough species.