Long Term Incubation Resilience of Post-Thaw Ram Semen Diluted with Lecithin-Based Extender Supplemented with Bovine Serum Albumin

Sığır Serum Albumini İlave Edilmiş Lesitin Bazlı Sulandırıcı İle Sulandırılan Koç Spermasının Dondurma-Çözdürme Sonrası Uzun Süreli İnkübasyon Direnci

SELİM ALÇAY,Mehmet Berk TOKER,ELİF GÖKÇE,Nail Tekin ÖNDER,BURCU ÜSTÜNER,ZEKARİYA NUR

Özet

The objective of the study was to determine the optimum concentration of BSA in lecithin-based extender for post-thawing quality and incubation resilience (0 h, 6 h and 10 h) of ram sperm. Ejaculates were collected from fie rams via electro ejaculation. Ejaculates were mixed to obtain pooled semen. Then, pooled semen was diluted with soybean lecithin-based extender without BSA (control) or supplemented with diffrent concentrations of BSA (2.5 mg/mL, 5 mg/mL, 7.5 mg/mL and 10 mg/mL), at a fial concentration of 150x106 spermatozoon/mL. Sperm motility, plasma membrane functional integrity (HOST), mitochondrial activity (rhodamine123), capacitation status (CTC), and DNA integrity (TUNEL) were evaluated. At the 10 h incubation, motility, plasma membrane functional integrity and mitochondrial function were better preserved in the BSA5 group compared to the control group. It was determined that high doses of BSA (5 mg/mL, 7.5 mg/mL and 10 mg/mL) affcted acrosome reaction. The highest acrosome reaction rates were obtained in BSA10 groups in 6 h and 10 h incubation (P<0.05). TUNEL assay demonstrated that there were no diffrences among groups for DNA fragmentation at post-thaw and during incubation periods. The study shows that BSA supplemented extenders may have benefiial effct on ram semen parameters at 0 h, 6 h and 10 h of incubation. The results of the present study demonstrated a remarkable advantage of using 5 mg/mL of BSA in 1% lecithin-based extender.

Abstract

Bu çalışmanın amacı koç spermasının dondurma çözdürme sonrası ve inkübasyon direnci göz önüne alınarak (0, 6 ve 10. saatler) lesitin bazlı sulandırıcı için uygun Sığır Serum Albumini BSA konsantrasyonunun belirlenmesidir. Bu amaçla 5 koçtan sperma örnekleri alınmıştır. Alınan spermalar bir araya getirildikten sonra fial konsantrasyonu 150x106 spermatozoon/mL olacak şekilde farklı dozlarda BSA içeren (2.5 mg/mL, 5 mg/mL, 7.5 mg/mL and 10 mg/mL) ve içermeyen (kontrol) soya fasülyesi lesitini bazlı sulandırıcılarla sulandırılmıştır. Spermanın değerlendirilmesi amacıyla motilite, plazma membran fonksiyonel bütünlüğü (HOST), mitokondriyal aktivite (Rhodamine123), kapasitasyon statüsü (CTC) ve DNA bütünlüğü değerlerine bakılmıştır. İnkübasyonun sonunda (10. saat) BSA5 grubunun motiliteyi, plazma membran fonksiyonel bütünlüğü ve mitokondriyal fonksiyonu diğer gruplara göre daha fazla koruduğu görülmüştür. BSA’nın yükselen dozları (5 mg/ mL, 7.5 mg/mL and 10 mg/mL) akrozom reaksiyonunu etkilemektedir. İnkubasyonun 6 ve 10. saatlerinde en yüksek akrozom reaksiyonu oranları BSA10 grubunda gözlemlenmiştir (P<0.05). TUNEL sonuçları göz önüne alındığında; çözdürme ve inkübasyon sonrası gruplar arası DNA bütünlüğü bakımından bir fark olmadığı görülmektedir. Çalışma sonucunda; sulandırıcıya BSA ilave edilmesinin inkubasyonun 0, 6 ve 10. saatlerinde koç sperm parametreleri üzerinde yararlı etkisi olduğu görülmektedir. Çalışma sonucu elde edilen veriler göz önüne alındığında %1 lesitin bazlı sulandırıcıya 5 mg/mL BSA ilavesinin önemli bir avantaj oluşturduğu görülmektedir.