Development and Validation of an In Vitro Dissolution Method Based on HPLC Analysis for L-Dopa Release From PLGA Nanoparticles

Optimize Edilen HPLC Yöntemi ile L-Dopa Yüklü PLGA Nanopartiküllerinden Etkin Madde Salımının Farklı İn Vitro Çıkış Yöntemleri ile Değerlendirilmesi

Özet

Objective: In the past decade, dissolution testing has emerged as a valauble tool for the characterization of drug product performance in the field of pharmaceuticals. During the development of new formulations, dissolutions tests assist in the evaulation of any changes in the formulation arising during manufacturing process, thereby assuring product quality and performance post manufacturing. Methods: In the present study, a simple high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed and validated to quantitate the release of L‐Dopa from poly (D, L‐lactic‐co‐glycolic acid) (PLGA) nanoparticles. The chromatographic separation was performed with a reversed‐phase C18 column, using acetonitrile‐ water containing 0.05% trifluoroacetic acid (5:95, v/v) as a mobile phase at 280 nm. The developed method was validated for its specificty, linearity, accuracy, and precision according to the ICH guidelines. Results: The developed method was shown to be linear (r2 ≥0.995) in the concentration range of 125-40 µg/mL. The mean % recoveries were found to be 102.59-98.70%, indicating an agreement between the true value and the detected value. Solution stability was guaranteed by the addition of an antioxidant. The analytical method was shown to be suitable for the evaluation of release of L‐Dopa from PLGA nanoparticles. In vitro release of L‐Dopa was studied using sample and separate (SS) and dialysis membrane (DM) methods. To compare SS and DM methods, difference (ƒ1) and similarity (ƒ2) factors were calculated. No significant differences were recorded in the release kinetics of L‐Dopa from nanoparticles using both methods (ƒ1 50). Conclusion: Dissolution test methods were compared and procedure for an analytical method based on HPLC was optimizated and validated for the dissolution of L‐Dopa loaded nanoparticles.

Abstract

Amaç: Farmasötik alanda çözünme hızı testleri, ilaç ürün performansını karakterize etmek için önemli parametrelerdendir. Üretim sürecinden sonra ürün kalitesini ve performansını sağlamak için, formülasyondaki değişiklikler, yeni formülasyonların geliştirilmesi sırasında çözünme testleriyle değerlendirilebilir. Yöntemler: Bu çalışmada, poli (D, L-laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) nanopartiküllerinden salınan L-Dopa miktarının belirlenmesi için yüksek basnıçlı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi geliştirilmiş ve onaylanmıştır. 280 nm hareketli faz olarak %0,05 trifloroasetik asit (5:95, h/h) içeren asetonitril-su kullanılarak, ters fazlı C18 kolonu ile kromatografik ayırma yapılmıştır. Geliştirilen yöntem, özgünlüğü, doğrusallığı, doğruluğu ve kesinliği için ICH kurallarına göre doğrulanmıştır. Bulgular: Yöntemin 1,25-40 µg/mL konsantrasyon aralığında doğrusal (r2 ≥0,995) olduğu gösterilmiştir. Ortalama % geri kazanım, %102,59-%98,70 arasında olup, gerçek değer ile tespit edilen değer arasında bir korelasyon olduğu belirlenmiştir. Antioksidan ilavesiyle çözelti stabilitesi sağlanmıştır. Analitik yöntemin nanopartiküllerden salınan L-Dopa’nın değerlendirilmesi için uygun olduğu gösterilmiştir. Örnek ve ayırma (SS) ve diyaliz membranı (DM) yöntemleri kullanılarak in vitro salım çalışmaları yapılmıştır. SS ve DM yöntemlerinin karşılaştırılmasında farklılık (ƒ1) ve benzerlik (ƒ2) faktörleri kullanılmıştır. Nanopartiküllerden L-Dopa'nın salım kinetiğindeki fark her iki yöntem için de anlamlı bulunmamıştır (ƒ1 50). Sonuç: Bu çalışmada, L-Dopa yüklü nanopartiküllerden etkin madde salımının değerlendirilmesi için stabilite testleri de dahil olmak üzere bir çözünme testi yöntemleri karşılaştırılmış ve salınan L-Dopa miktarının tespiti için HPLC yöntemi optimize edilmiş ve valide edilmiştir.