Determining Genetic Variation of Calpastatin Gene with MspI and NcoI Enzymes by Using PCR-RFLP Method in Kivircik Lambs

Kıvırcık Kuzularda PCR-RFLP Metodu Kullanılarak Calpastatin Geninin MspI ve NcoI Enzimleri ile Genetik Çeşitliliğinin Belirlenmesi

Özet

The aim of this study was to determine the genetic variation of calpastatin gene by using PCR-RFLP method with MspI and NcoI enzymes in Kivircik lambs. Blood samples of Kivircik lambs (n=153) that were collected from eight different farms located in Kirklareli province, were used for DNA isolation. After PCR amplification, products were digested with MspI and NcoI enzymes to differentiate M and N alleles on 2% and 3% agarose gel electrophoresis. The frequency of M and N alleles were found 88.2% and 11.8% for MspI locus and 98.7% and 1.3% for NcoI locus respectively. The frequencies of MM, MN and NN genotypes were identified 0.77, 0.22 and 0.01 respectively for MspI locus. The frequencies of MM and MN genotypes were determined 0.97 and 0.03 respectively for NcoI locus, NN genotype was not observed. Observed heterozygosity was higher in MspI (0.22) than NcoI locus (0.03). MspI and NcoI loci were found in Hardy-Weinberg equilibrium in Kivircik lambs raised in Kirklareli province.

Abstract

Bu çalışmanın amacı Kıvırcık kuzularda PCR-RFLP yöntemi ile MspI ve NcoI enzimleri kullanılarak kalpastatin geninin genetik çeşitliliğini belirlemektir. Kırklareli ilinde bulunan sekiz farklı çiftlikten toplanan Kıvırcık kuzularının (n=153) kan örnekleri DNA izolasyonu için kullanılmıştır. PCR amplifikasyonundan sonra, ürünler %2’lik ve %3’lük agaroz jel elektroforezinde M ve N allellerini ayırt etmek için MspI ve NcoI enzimleri ile kesilmiştir. M ve N allellerinin frekansı MspI lokusunda sırasıyla %88,2 ve %11,8, NcoI lokusunda %98,7 ve %1,3 olarak bulunmuştur. MspI lokusu için MM, MN ve NN genotiplerinin frekansları sırasıyla 0,77, 0,22 ve 0,01 olarak tespit edilmiştir. NcoI lokusu için MM ve MN genotiplerinin frekansları sırasıyla 0,97 ve 0,03 olarak belirlenmiştir, NN genotipi ise gözlenmemiştir. Gözlenen heterozigotluk MspI lokusu için (0,22), NcoI lokusundan (0,03) daha yüksek olarak bulunmuştur. Kırklareli ilinde yetiştirilen Kıvırcık kuzuları MspI ve NcoI lokusları için Hardy-Weinberg dengesinde bulunmuştur.